mAb de lapin anti-MonoMéthyl-Histone H3-K36 (Q16695/P68431) pour WB, DB, IP, ELISA, ChIP

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de MonoMéthyl-Histone H3-K36

• L'histone H3 est un composant essentiel du nucléosome, qui enroule et compacte l'ADN en chromatine. Cette structure limite l'accessibilité de l'ADN et joue un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. La régulation dynamique de la chromatine est notamment médiée par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles des histones, collectivement désigné sous le nom de code des histones.

• Chez l'homme, plusieurs gènes codent pour des variants canoniques de l'histone H3. H3.1 (représenté par SWISS P68431 et ses nombreux produits géniques tels que H3C1–H3C12) est la forme majoritaire dépendante de la réplication. Un variant d'histone H3 spécifique du testicule, H3.1t (SWISS Q16695 ; également appelé H3/t ou H3.4), est exprimé exclusivement dans les cellules testiculaires et pourrait contribuer à la réorganisation de la chromatine au cours de la spermatogenèse.

• La queue N-terminale de l'histone H3 subit de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la méthylation de résidus lysine spécifiques. La monométhylation de la lysine 36 (H3K36me1) est l'une de ces modifications critiques, correspondant à la méthylation de la Lys-37 dans la séquence canonique UniProt. Cette modification a été identifiée dans de multiples études protéomiques. Références associées : PMID:15983376, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708

• H3K36me1 est impliqué dans l'élongation transcriptionnelle, l'épissage des pré-ARNm et la réparation de l'ADN. La modification est établie par des méthyltransférases telles que NSD1, NSD2 et SETD2 (qui peuvent également catalyser des états de méthylation supérieurs), et est éliminée par des histones déméthylases. Sa distribution génomique est typiquement associée aux corps de gènes actifs, ce qui souligne son rôle dans la régulation génique.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène utilisé pour générer cet anticorps est un peptide monométhylé synthétique centré sur K36 de l'histone H3 humaine. Lors de la conception et la validation de vos protocoles expérimentaux, gardez à l'esprit que la reconnaissance par l'anticorps peut dépendre de l'état de méthylation spécifique (me1) et être influencée par des modifications post-traductionnelles adjacentes. Pour les applications ChIP, assurez-vous que le contexte de la chromatine cible et la spécificité de l'anticorps sont vérifiés à l'aide de contrôles positifs et négatifs appropriés.

• En Western blotting, la bande protéique attendue est d'environ 15 kDa. Utilisez des gels à haut pourcentage (par exemple 12–15 % SDS-PAGE) et des conditions de transfert optimisées (pour les bas poids moléculaires) pour obtenir une résolution claire. Il est recommandé d'inclure un marqueur d'histones ou un contrôle d'histone H3 total pour une identification précise.

• Pour l'ELISA et le dot blot (DB), l'inclusion de peptides synthétiques représentant H3K36 non méthylé, monométhylé, diméthylé et triméthylé dans la conception du test permet de confirmer la reconnaissance spécifique de la modification.

• Le produit indique une large réactivité croisée prédite (Homme, Souris, Rat, et autres). Bien que cela suggère une compatibilité interespèces étendue, une validation pour votre espèce et votre type de tissu spécifiques est fortement recommandée, en particulier pour les applications non humaines.

• Pour toutes les applications, les dilutions de travail et les conditions optimales doivent être déterminées expérimentalement en utilisant le système d'échantillon approprié.

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