mAb Rabbit anti-Histone H3-K36 monométhylé (Q16695/P68431) pour WB, DB, IHC-P, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est un composant essentiel du nucléosome, qui enroule et compacte l'ADN en chromatine. Cette compaction limite l'accessibilité de l'ADN aux machineries cellulaires qui utilisent l'ADN comme matrice. Par conséquent, les histones jouent un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. L'accessibilité de l'ADN est régulée par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles des histones, collectivement appelé code histone, et par le remodelage des nucléosomes. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

Plusieurs gènes codent pour des variants de l'histone H3. Les remarques et alias du produit incluent H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12 et HIST1H3A, ce qui reflète les différents gènes de l'histone H3.1 dépendants de la réplication. De plus, le variant spécifique du testicule H3.1t (H3t, codé par H3-4 / HIST3H3) est représenté par l'accession SWISS Q16695. Ces variants sont très similaires en séquence. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

Au niveau subcellulaire, l'histone H3 est localisée dans le noyau et constitue un composant majeur des chromosomes. Sa présence est ubiquitaire dans les nucléosomes sur l'ensemble du génome. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

Les modifications post-traductionnelles de l'histone H3, notamment la méthylation, l'acétylation, la phosphorylation et d'autres, ajustent finement la structure et la fonction de la chromatine. La monométhylation au niveau de la lysine 36 (K36) est l'une de ces modifications. Cet anticorps détecte spécifiquement la forme monométhylée de K36 et a été généré à partir d'un immunogène peptide monométhylé synthétique ciblant ce résidu. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Le poids protéique prévu de l'histone H3 est d'environ 15 kDa. Cependant, du fait de sa nature fortement basique, l'histone H3 migre souvent à un poids moléculaire apparent légèrement plus élevé sur SDS-PAGE. Vérifiez le profil de migration spécifique dans votre système d'échantillons.
• Cet anticorps a été obtenu contre un peptide monométhylé synthétique autour de K36. Il est prévu qu'il reconnaisse spécifiquement la forme monométhylée plutôt que les états non modifiés ou autres états de méthylation. Confirmez la spécificité à l'aide de tests de compétition peptidique ou en comparant les signaux de lysats cellulaires traités avec des agents modificateurs de la méthylation.
• Pour le Western blot (WB) et le dot blot (DB), envisagez d'utiliser des protocoles d'extraction d'histones qui enrichissent les protéines nucléaires pour améliorer la sensibilité de détection.
• En immunohistochimie (IHC-P), les conditions de récupération d'antigène (par exemple, tampon citrate pH 6,0 ou tampon EDTA pH 9,0) peuvent nécessiter une optimisation. Incluez des tissus contrôles positifs et négatifs connus pour évaluer la spécificité de la coloration.
• L'ELISA peut être utilisé pour le criblage à haut débit ou les expériences de titrage. Associez cet anticorps à un anticorps secondaire anti-lapin approprié conjugué à la HRP ou une autre enzyme rapporteur pour la détection.

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