AcMonoclonal de lapin contre Histone H3-K18 monométhylée (Q16695/P68431) pour ChIP & CUT&Tag | WB, IHC-P, IF, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

Les histones sont les principales composantes protéiques de la chromatine : elles agissent comme des bobines autour desquelles l'ADN s'enroule. L'histone H3, avec H2A, H2B et H4, forme le cœur du nucléosome. Ces nucléosomes compactent l'ADN et régulent son accessibilité pour la transcription, la réplication, la réparation et la stabilité chromosomique. La queue N-terminale de l'histone H3 est sujette à de nombreuses modifications post-traductionnelles (MPT), notamment la méthylation, l'acétylation, la phosphorylation et d'autres, qui constituent collectivement le « code histone » et orchestrent la dynamique de la chromatine et l'expression génique.

La lysine 18 (K18) de l'histone H3 (correspondant à la position 19 dans le précurseur) est un résidu clé qui peut être monométhylé. Cette modification, associée à d'autres MPT sur ce site, influence la liaison des protéines effectrices et module la structure de la chromatine. Si l'acétylation de K18 est souvent liée à l'activation transcriptionnelle, les états de méthylation peuvent avoir des effets dépendants du contexte. La monométhylation de H3K18 est impliquée dans la régulation de l'expression génique et le maintien d'une fonction correcte de la chromatine.

Références associées : PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708.

Les entrées SWISS Q16695 (Histone H3.1t) et P68431 (Histone H3.1) représentent deux variants de l'histone H3 humaine. Q16695 est principalement exprimé dans les cellules testiculaires, où il remplace l'histone H3.1 canonique au cours de la spermatogenèse. P68431 est une histone dépendante de la réplication exprimée dans les cellules somatiques et est largement distribuée. Les deux variants se localisent dans le noyau et sur les chromosomes.

Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431.

Conseils expérimentaux et techniques

• Cet anticorps a été généré à partir d'un peptide synthétique monométhylé autour du résidu K18. Pour garantir la spécificité pour la forme monométhylée, il est recommandé de réaliser un test de compétition par peptide avec les peptides correspondants non modifiés ou di-/triméthylés lors de la validation initiale.
• Pour le Western blot (WB), il est recommandé d'utiliser des extraits d'histones de cellules humaines, murines ou de rat comme matériau de départ. Une bande spécifique d'environ 15 kDa est attendue. Utilisez des contrôles appropriés, notamment un anticorps anti-H3 total, pour confirmer un chargement égal.
• Dans les expériences d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) et CUT&Tag, la titration de l'anticorps est essentielle. Il est conseillé d'inclure des régions génomiques de contrôle positif connues pour héberger la monométhylation de H3K18 (si disponible) et des loci de contrôle négatif. Les conditions de réticulation peuvent influencer l'accessibilité de l'épitope : envisagez d'utiliser à la fois des protocoles de ChIP natifs et réticulés.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), les conditions de récupération d'antigène peuvent nécessiter une optimisation. Il est recommandé d'utiliser des échantillons de tissus ou de cellules dont les niveaux de H3K18me1 sont documentés pour établir la spécificité de la coloration.
• Les applications ELISA et dot blot (DB) peuvent être utilisées pour vérifier rapidement le titre et la spécificité de l'anticorps sur différents peptides à états de méthylation variés.

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