[KO validé] Anticorps monoclonal de lapin anti-IRF3 - Q14653

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’IRF3

• L’IRF3 est un régulateur transcriptionnel clé des réponses immunitaires dépendantes de l’interféron (IFN) de type I, jouant un rôle essentiel dans l’immunité innée contre les virus à ADN et à ARN. Il régule la transcription des gènes codant les IFN de type I (IFN-alpha et IFN-beta) ainsi que des gènes stimulés par l’IFN (ISG) en se liant aux éléments de réponse stimulés par l’interféron (ISRE) présents dans leurs promoteurs. Références associées : PMID:22394562 PMID:24049179 PMID:25636800 PMID:11846977 PMID:16846591 PMID:16979567
• Dans les cellules non infectées, l’IRF3 se trouve dans le cytoplasme sous une forme inactive. Lors d’une infection virale, en présence d’ARN double brin (ARNdb) ou à la suite d’une signalisation par les récepteurs de type Toll (TLR), il est phosphorylé par les kinases IKBKE et TBK1, ce qui induit un changement conformationnel menant à sa dimérisation, à sa localisation nucléaire et à son association avec CREBBP pour former le complexe 1 activé par l’ARNdb (DRAF1), lequel active les gènes codant les IFN de type I et les ISG. Références associées : PMID:22394562 PMID:25636800 PMID:27302953 PMID:16154084 PMID:33440148
• L’IRF3 peut activer des programmes distincts d’expression génique dans les macrophages et induire une apoptose importante dans les macrophages primaires. En réponse à une infection par le virus Sendai, l’IRF3 est recruté par TOMM70:HSP90AA1 vers les mitochondries, où il forme le complexe apoptotique TOMM70:HSP90AA1:IRF3:BAX, induisant l’apoptose. Références associées : PMID:16846591 PMID:25609812
• L’IRF3 est un facteur de transcription clé qui régule la réponse à l’IFN lors d’une infection par le SARS-CoV-2. Références associées : PMID:33440148
• La localisation subcellulaire comprend le cytoplasme, le noyau et les mitochondries, ce qui est cohérent avec sa régulation dynamique au cours de la signalisation.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la phosphorylation (essentielle à l’activation), l’acétylation, la formation de ponts disulfure, la formation de liaisons isopeptidiques et la conjugaison aux Ubl.
• Son expression constitutive dans divers tissus souligne son rôle étendu dans la défense antivirale.
• L’épissage alternatif produit plusieurs isoformes, susceptibles de moduler sa fonction dans différents contextes.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L’immunogène correspond aux acides aminés 1 à 260 de l’IRF3 humain (NP_001184051.1), couvrant la région N-terminale qui comprend les domaines de liaison à l’ADN et de régulation. Cette conception peut détecter les formes phosphorylées et non phosphorylées, ce qui la rend adaptée au suivi des niveaux totaux d’IRF3.
• Pour le Western blot, envisagez d’utiliser des lysats provenant de cellules stimulées par des mimétiques viraux (par exemple, poly(I:C)) ou par des interférons afin d’observer les décalages de bandes dépendants de l’activation, caractéristiques de la phosphorylation. Validez le résultat dans le système d’échantillonnage pertinent, tel que des cellules infectées par un virus ou activées par les TLR.
• En immunohistochimie et en immunofluorescence, les méthodes de récupération antigénique et de fixation appropriées doivent être optimisées afin de préserver la conformation native de l’IRF3, notamment parce qu’il subit une translocation nucléaire dépendante de la phosphorylation.
• Pour l’immunoprécipitation, assurez-vous d’utiliser des conditions de lyse douces afin de préserver les interactions protéine-protéine, car l’IRF3 forme des complexes avec des partenaires tels que CREBBP et TBK1.
• La réactivité de l’anticorps avec les espèces murine et rat (fondée sur l’homologie de séquence) permet de réaliser des études interspécifiques, mais il est recommandé de vérifier la réactivité dans le modèle expérimental spécifique.

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