[Validé KO] Anticorps monoclonal de lapin contre la Gasdermine E clivée (extrémité N-terminale) pour WB, IHC-P, ELISA - O60443

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la Gasdermine E

• La Gasdermine E (GSDME), également appelée DFNA5 ou ICERE-1, est un membre de la famille des gasdermines, une famille de protéines formatrices de pores. Elle est exprimée sous forme de précurseur qui est clivé pour libérer un fragment N-terminal actif, et plusieurs isoformes sont produites par épissage alternatif.
• Après clivage par la caspase-3 (CASP3) ou la granzyme B (GZMB) au niveau de l'Asp270, le fragment N-terminal se transloque vers la membrane plasmique, s'oligomérise et forme des pores d'un diamètre interne de 10 à 15 nm, déclenchant la pyroptose et la libération de cytokines inflammatoires comme l'IL-1β et l'IL-16. Références associées : PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• La pyroptose médiée par GSDME agit comme un mécanisme de suppression tumorale : la granzyme B délivrée par les cellules natural killer (NK) clive GSDME dans les cellules tumorales, induisant la pyroptose et une immunité antitumorale robuste. Références associées : PMID:21522185, PMID:32188940, PMID:31953257
• En aval de la voie apoptotique mitochondriale et des dommages à l'ADN, GSDME peut convertir l'apoptose en nécrose secondaire et en pyroptose, partiellement via la signalisation p53/TP53. Références associées : PMID:28045099, PMID:16897187
• GSDME présente une activité bactéricide et favorise la pyroptose en réponse à des infections microbiennes, notamment la pyroptose placentaire induite par le virus Zika qui affecte le devenir fœtal. Références associées : PMID:27281216
• En termes de localisation subcellulaire, la GSDME pleine longueur est principalement cytoplasmique, tandis que le fragment N-terminal clivé se localise sur la membrane cellulaire où il forme des pores.
• GSDME est exprimée dans la cochlée et à faible niveau dans de nombreux tissus, avec l'expression la plus élevée dans le placenta. Des mutations du gène sont associées à une surdité autosomique dominante non syndromique. Références associées : PMID:9771715
• Les modifications post-traductionnelles, notamment la palmitoylation et la formation de liaisons isopéptidiques, peuvent réguler l'activation de GSDME et son insertion dans la membrane.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène de cet anticorps est conçu autour du site de clivage Asp270, ce qui le rend spécifique du fragment N-terminal. Validez la spécificité dans votre système expérimental à l'aide de contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, échantillons non traités vs traités par des inducteurs d'apoptose/pyroptose).
• Pour le Western blot, attendez-vous à plusieurs bandes en raison du précurseur non clivé (~55 kDa) et des fragments clivés (extrémité N-terminale à ~11 kDa et 35 kDa, selon l'isoforme). Optimisez les conditions de chargement et de détection pour distinguer ces différentes formes.
• Pour l'IHC-P, réalisez une récupération d'antigène et testez une gamme de dilutions pour obtenir une coloration optimale. L'anticorps a été validé pour des échantillons humains ; la réactivité croisée avec d'autres espèces n'est pas rapportée, confirmez donc la réactivité si vous utilisez des tissus non humains.
• Pour l'ELISA, envisagez de l'associer à un anticorps spécifique de l'extrémité C-terminale pour un ELISA sandwich afin de quantifier la GSDME clivée. Réalisez des expériences pilotes pour établir la sensibilité et la gamme dynamique.
• Dans les études sur la pyroptose, surveillez le clivage comme indicateur ; associez-le à des essais d'activité de la caspase-3 ou à la détection de la granzyme B pour obtenir des connaissances mécanistiques.

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