Anticorps polyclonal de lapin anti-HMGB1 validé par KO pour WB, IHC-P, ELISA - P09429

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'HMGB1

• L'HMGB1 (High mobility group protein B1), codée par le gène HMGB1, est une protéine ubiquitaire associée à la chromatine non histonique qui est également activement sécrétée ou passivement libérée pour agir en tant que motif moléculaire associé aux dommages (DAMP) et cytokine/chimiokine.
• Dans le noyau, l'HMGB1 se lie préférentiellement aux structures d'ADN non canoniques (simple brin, cruciforme, superenroulé et Z-ADN) et courbe l'ADN pour faciliter le remodelage de la chromatine et améliorer l'accès des facteurs de transcription (PubMed:20123072). Elle participe à de multiples voies de réparation de l'ADN, notamment la réparation par excision de nucléotides, la réparation des mésappariements et la réparation par excision de base (PubMed:15014079, PubMed:16143102, PubMed:17803946, PubMed:19360789, PubMed:19446504). Références associées : PMID:20123072 PMID:15014079 PMID:16143102 PMID:17803946 PMID:19360789 PMID:19446504
• Dans le cytoplasme, l'HMGB1 favorise l'autophagie en perturbant de manière compétitive l'interaction BECN1:BCL2 (PubMed:20819940) et est impliquée dans l'autophagie induite par le stress oxydatif (PubMed:21395369). Références associées : PMID:20819940 PMID:21395369
• Extracellulairement, l'état redox de l'HMGB1 dicte sa fonction : l'HMGB1 totalement réduite agit comme une chimiokine, la forme disulfure comme une cytokine pro-inflammatoire, et la forme sulfonyle favorise la tolérance immunologique (PubMed:23446148, PubMed:23519706, PubMed:23994764). Elle interagit avec de multiples récepteurs de surface, notamment AGER/RAGE, TLR2 et TLR4, pour induire la libération de cytokines et le recrutement de cellules immunitaires (PubMed:12765338, PubMed:18354232, PubMed:19264983, PubMed:15607795, PubMed:20547845). Références associées : PMID:23446148 PMID:23519706 PMID:23994764 PMID:12765338 PMID:18354232 PMID:19264983 PMID:15607795 PMID:20547845
• L'HMGB1 facilite l'entrée du SARS-CoV et du SARS-CoV-2 en régulant l'expression des récepteurs viraux ACE2 et CTSL par modulation de la chromatine (PubMed:33147444) et est nécessaire à la réticulophagie induite par l'ORF3A du SARS-CoV-2 (PubMed:35239449). Références associées : PMID:33147444 PMID:35239449
• Les modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la phosphorylation, l'ADP-ribosylation et l'oxydation, régulent dynamiquement la localisation subcellulaire, l'affinité de liaison à l'ADN et les activités immunomodulatrices de l'HMGB1.
• L'HMGB1 est exprimée de manière ubiquitaire et a été détectée dans les plaquettes (PubMed:11154118). Références associées : PMID:11154118

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 69-168, englobant la boîte HMG B conservée et une partie de la queue C acide. Cette région est hautement conservée chez l'humain, la souris et le rat, ce qui soutient la réactivité croisée de l'anticorps.
• Pour le Western blot, une bande autour de 25 kDa est attendue ; notez que les modifications post-traductionnelles peuvent provoquer de légers décalages. Une validation par knockout a été effectuée ; pensez à inclure des contrôles positifs et négatifs appropriés.
• Pour l'IHC-P, une récupération d'antigène peut être nécessaire. Optimisez les conditions de coloration en utilisant des tissus témoins positifs connus (par exemple, des tissus présentant une forte expression d'HMGB1 tels que les organes lymphoïdes ou les tumeurs).
• En ELISA, l'anticorps peut être utilisé pour la capture ou la détection ; cependant, l'appariement avec un anticorps de détection correspondant doit être validé pour le format de dosage spécifique.
• Comme l'HMGB1 est un DAMP qui peut être libéré par des cellules endommagées, évitez une lyse cellulaire ou des dommages tissulaires excessifs lors de la préparation des échantillons afin de minimiser le bruit de fond.

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