[KO Validated] Anticorps polyclonal anti-HER2/ErbB2 pour WB, ELISA - P04626

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de HER2/ErbB2

• HER2/ErbB2 est un récepteur à activité tyrosine-protéine kinase codé par le gène ERBB2 (GeneID : 2064) et appartient à la famille des récepteurs du facteur de croissance épidermique (EGFR/ErbB). La protéine complète est une protéine membranaire de type I à passage unique, composée de 1255 acides aminés, avec un poids moléculaire prédit de 137,9 kDa (observé à environ 138 kDa).
• Il fonctionne comme corécepteur dans les complexes récepteur-neuréguline, essentiels à la signalisation dépendante des ligands, mais nécessite une hétérodimérisation avec d’autres membres de la famille ErbB (par exemple EGFR, ErbB3, ErbB4) pour une liaison de haute affinité aux ligands et l’activation de la kinase.
• La signalisation de HER2 régule la croissance et la stabilisation des microtubules périphériques par l’intermédiaire de la voie MEMO1-RHOA-DIAPH1, en inhibant GSK3B et en favorisant l’association membranaire d’APC et de CLASP2, ce qui facilite à son tour la capture et la stabilisation des microtubules.
• Dans le noyau, HER2 agit comme régulateur transcriptionnel en se liant au promoteur de PTGS2/COX-2 (séquence 5’-TCAAATTC-3’) afin d’activer la transcription. Il favorise également l’expression de CDKN1A par l’intermédiaire de STAT3 et SRC, ainsi que la transcription des gènes de l’ARNr par l’ARN Pol I, ce qui accroît la synthèse protéique et la croissance cellulaire.
• La localisation subcellulaire comprend la membrane cellulaire, la membrane des ondulations, l’endosome précoce, le cytoplasme (région périnucléaire) et le noyau, reflétant ses divers rôles dans la signalisation et la transcription.
• HER2 est surexprimé dans divers tissus tumoraux, notamment dans les cancers primitifs du sein, de l’intestin grêle, de l’œsophage, du rein et de la cavité buccale, ce qui en fait un biomarqueur et une cible thérapeutique essentiels.
• Les principales modifications post-traductionnelles comprennent la phosphorylation (phosphoprotéine) et la glycosylation ; la protéine possède également un peptide signal, des ponts disulfure et des isoformes issues d’initiations et d’épissages alternatifs.
• Les mots-clés UniProt mettent en évidence ses rôles biologiques : activateur, épissage alternatif, liaison à l’ATP, membrane cellulaire, variant pathologique, kinase, récepteur, signal, régulation de la transcription, transférase, transmembranaire.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• La séquence de l’immunogène (aa 1156–1255) se situe dans le domaine cytoplasmique C-terminal de HER2 ; par conséquent, cet anticorps devrait reconnaître la forme complète (~138 kDa) en Western blot (WB), avec une détection potentielle des isoformes tronquées ou issues d’un épissage alternatif si elles conservent cet épitope.
• Pour le WB, utiliser des conditions réductrices ; la protéine mature glycosylée et phosphorylée peut migrer légèrement plus haut. Valider la spécificité de la bande à l’aide de lignées cellulaires positives et négatives pour HER2 (par exemple SK-BR-3 et MCF-7) et, si disponibles, de lysats validés par KO, comme indiqué par la validation du produit.
• Pour les applications ELISA, envisager un revêtement avec le peptide ou une capture directe de l’antigène en raison de la localisation intracellulaire de l’épitope. Optimiser les conditions de revêtement et les dilutions d’anticorps dans des matrices d’échantillons pertinentes.
• En raison de sa forte expression dans les tumeurs, les lysats de lignées cellulaires de cancer du sein ou de tissus tumoraux peuvent produire des signaux intenses ; inclure des contrôles de charge appropriés et normaliser par rapport à la quantité totale de protéines.

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