[KO validé] Anticorps polyclonal de lapin anti-CDKN2A/p16INK4a pour WB, IF/ICC, ELISA - P42771 / Q8N726

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CDKN2A/p16INK4a

• CDKN2A code l’inhibiteur 2A des kinases dépendantes des cyclines, également appelé p16INK4a, suppresseur de tumeur multiple 1 (MTS-1) et CDK4I. Il agit comme un régulateur négatif de la progression du cycle cellulaire en inhibant CDK4 et CDK6, empêchant ainsi la phosphorylation de la protéine du rétinoblastome.
• La protéine se localise à la fois dans le cytoplasme et dans le noyau, ce qui concorde avec son rôle dans le contrôle de l’entrée dans le cycle cellulaire.
• CDKN2A est largement exprimé dans les tissus normaux, à l’exception notamment du cerveau et des muscles squelettiques. L’isoforme 3 présente une expression spécifique du pancréas.
• p16INK4a est un suppresseur de tumeur fréquemment muté ou délété dans divers cancers, notamment dans le syndrome de Li-Fraumeni, ce qui souligne son rôle essentiel dans le maintien de la stabilité génomique.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles telles que l’acétylation et la phosphorylation, qui peuvent réguler son activité et sa stabilité.
• p16INK4a contient des motifs de répétition ANK, facilitant les interactions protéine-protéine essentielles à sa fonction inhibitrice sur CDK4/6.
• Les études fonctionnelles démontrent que l’induction de p16INK4a entraîne un arrêt du cycle cellulaire en phase G1, soulignant son importance dans la sénescence et la suppression tumorale.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L’immunogène est un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 1–156 de p16INK4a humaine (NP_000068.1). Pour le Western blot, il est recommandé d’utiliser des lysats cellulaires totaux provenant de lignées cellulaires humaines connues pour exprimer CDKN2A. Le produit étant validé par KO, il est recommandé d’inclure un lysat témoin issu d’une invalidation de CDKN2A afin de confirmer la spécificité de la bande.
• Le poids moléculaire prédit de p16INK4a est d’environ 16 kDa, bien que plusieurs isoformes (8–17 kDa) puissent être détectées en raison de l’épissage alternatif et des modifications post-traductionnelles. Optimiser le pourcentage de gel et les conditions de transfert pour les protéines de faible poids moléculaire.
• Pour l’immunofluorescence (IF/ICC), une fixation appropriée (par exemple, avec 4 % de paraformaldéhyde) et une perméabilisation (par exemple, avec 0,1 % de Triton X-100) sont recommandées. p16INK4a se localise à la fois dans le noyau et dans le cytoplasme ; l’imagerie doit donc couvrir l’ensemble de la cellule.
• Pour les applications ELISA, l’anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection après validation avec l’antigène cible. Veiller à utiliser un tampon de revêtement et des étapes de blocage appropriés afin d’obtenir un signal optimal.

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