[Validé par KO] Anticorps monoclonal de lapin anti-CDK4 pour WB, IP, IHC-P, ELISA - P11802

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la CDK4

• La kinase dépendante des cyclines 4 (CDK4) est une sérine/thréonine-protéine kinase et un régulateur clé de la transition G1/S du cycle cellulaire. Elle forme des complexes avec les cyclines de type D pour phosphoryler les protéines de la famille du rétinoblastome (RB), libérant ainsi les facteurs de transcription E2F et favorisant la progression du cycle cellulaire.
• Contrairement à d'autres CDK, la CDK4 est relativement spécifique à la phase G1, où elle hypophosphoryle RB1 au début de la phase G1, permettant une hyperphosphorylation ultérieure par les complexes cycline E-CDK2.
• La CDK4 se localise dans le cytoplasme, le noyau et la membrane nucléaire, et sa translocation nucléaire est régulée par le complexe ternaire cycline D/CDK4/CDKN1B.
• L'épissage alternatif de la CDK4 génère de multiples isoformes, et les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation et la phosphorylation, qui modulent son activité et sa stabilité.
• Au-delà des protéines RB, la CDK4 phosphoryle SMAD3 de manière dépendante du cycle cellulaire, réprimant son activité transcriptionnelle et reliant la signalisation TGF-β au contrôle du cycle cellulaire.
• La CDK4 intègre divers signaux mitogènes et antimitogènes, ce qui en fait un nœud critique dans le contrôle de la prolifération ; sa dérégulation est fréquemment observée dans le cancer, et il s'agit d'un locus variant connu associé à des maladies.
• Les mots-clés associés à la CDK4 incluent la liaison à l'ATP, la liaison aux nucléotides, la transférase, la phosphoprotéine et le protéome de référence, soulignant ses rôles enzymatiques et régulateurs.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène de cet anticorps comprend un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 204–303 de la CDK4 humaine, situés dans la région C-terminale. L'anticorps est donc censé reconnaître la CDK4 pleine longueur et peut également détecter des fragments C-terminaux s'ils sont présents.
• Pour le western blot, une bande spécifique autour de 34 kDa est attendue, ce qui est cohérent avec le poids moléculaire prédit de la CDK4. De légères variations du poids moléculaire observé peuvent survenir en raison de modifications post-traductionnelles ou de l'expression d'isoformes.
• La validation par knockout (KO) fournit une preuve solide de spécificité. En guise de bonne pratique, envisagez d'inclure un lysat cellulaire de knockout CDK4 comme contrôle négatif pour confirmer l'identité de la bande dans votre système expérimental.
• En immunoprécipitation, utilisez des conditions de lyse natives pour préserver les interactions protéine-protéine si vous étudiez les complexes de CDK4. L'origine monoclonale de lapin de l'anticorps garantit souvent une haute affinité et une cohérence entre les lots.
• Pour les expériences d'immunohistochimie (paraffine), une récupération d'antigène peut être nécessaire ; l'optimisation du tampon de récupération et du protocole est recommandée pour chaque type de tissu.
• Bien que l'anticorps soit validé pour plusieurs espèces (humain, souris, rat, singe), vérifiez toujours la réactivité croisée dans votre échantillon spécifique en raison de variations potentielles de séquence.

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