Anticorps monoclonal de lapin anti-Caspase-9 validé par KO pour WB, IF/ICC, ELISA - P55211

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Caspase-9

• Caspase-9 est un membre de la famille des cystéine-aspartique protéases (caspases) qui agit comme caspase initiatrice clé dans la voie apoptotique intrinsèque. Elle est codée par le gène CASP9 (GeneID : 842) et est également connue sous le nom de protéase apoptotique Mch-6, APAF-3 et ICE-LAP6.
• Lors de sa liaison à Apaf-1, caspase-9 forme l'apoptosome et s'active. Elle clive ensuite et active les caspases effectrices en aval, principalement caspase-3 et caspase-7, pour accomplir l'apoptose.
• Caspase-9 promeut l'apoptose induite par des dommages à l'ADN d'une manière dépendante d'ABL1/c-Abl. Elle clive également par protéolyse la poly(ADP-ribose) polymérase (PARP) et BIRC6. Le clivage de BIRC6 a lieu après l'inhibition de la liaison BIRC6-caspase par DIABLO/SMAC. Références associées : PMID:36758105 PMID:36758106
• Une isoforme issue d'épissage alternatif (isoforme 2) n'a pas d'activité catalytique et agit comme inhibiteur dominant-négatif de caspase-9, ce qui constitue un mécanisme de régulation.
• L'expression tissulaire est ubiquitaire, avec les niveaux les plus élevés dans le cœur (spécifiquement dans les myocytes), une expression modérée dans le foie, le muscle squelettique et le pancréas, et des niveaux faibles dans les autres tissus.
• En tant que zymogène, caspase-9 nécessite un clivage protéolytique pour s'activer. Elle est en outre régulée par phosphorylation et ubiquitinylation. La protéine est classée comme thiol protéase et sa structure 3D a été résolue.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène utilisé pour obtenir cet anticorps couvre les acides aminés 139–416, qui inclut le domaine catalytique. Par conséquent, l'anticorps peut détecter à la fois la proforme pleine longueur (~ 46 kDa) et les fragments actifs clivés. Pensez à inclure des contrôles appropriés lors de l'évaluation de l'activation des caspases.
• Pour le Western blot, une bande principale proche de 46 kDa est attendue dans les échantillons non traités ; des bandes plus petites supplémentaires peuvent apparaître après induction de l'apoptose. Validez le profil spécifique dans votre système modèle.
• Cet anticorps a été validé par KO, ce qui garantit une spécificité fiable pour Caspase-9 dans des échantillons humains, de souris et de rat. Il est adapté pour la détection des niveaux endogènes.
• Dans les expériences IF/ICC, caspase-9 se localise majoritairement dans le cytoplasme mais peut être observée dans le noyau dans certaines conditions apoptotiques. Optimisez les protocoles de fixation et de perméabilisation en conséquence.
• Pour les applications ELISA, évaluez cet anticorps dans le cadre d'une paire appariée avec d'autres clones anti-Caspase-9 pour obtenir une sensibilité et une spécificité optimales.

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