[KO Validé] Anticorps monoclonal lapin anti-Caspase-8 pour WB, ELISA - Q14790

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la Caspase-8

• La Caspase-8 (aussi appelée FLICE, MACH, MCH5) est une caspase initiatrice de 55 kDa de la famille des protéases à cystéine-aspartique, produite en plusieurs isoformes par épissage alternatif ; l'isoforme 1 pleine longueur est catalytiquement active, tandis que les isoformes plus courtes peuvent agir comme inhibiteurs dominants négatifs.
• En tant qu'initiateur clé de l'apoptose extrinsèque, la Caspase-8 est recrutée via l'adaptateur FADD vers les complexes de récepteurs de mort (DISC) après stimulation par FAS ou TNFRSF1A, ce qui entraîne sa dimérisation, son clivage autocatalytique puis l'activation en aval des caspases effectrices (CASP3/7) et de BID pour exécuter la mort cellulaire. Références associées : PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• Au-delà de l'apoptose, la Caspase-8 régule négativement la nécroptose en clivant RIPK1 au niveau de l'Asp-324, ce qui inhibe l'activité kinase de RIPK1 et prévient la signalisation nécroptotique et inflammatoire induite par le TNF. Références associées : PMID:31827280, PMID:31827281
• La Caspase-8 médie également la pyroptose en clivant et activant la gasdermine C (GSDMC) et la gasdermine D (GSDMD), libérant leurs domaines N-terminaux formant des pores qui provoquent la rupture de la membrane et la mort cellulaire inflammatoire. Références associées : PMID:32929201, PMID:34012073
• Elle se localise principalement dans le cytoplasme, mais peut être présente dans le noyau et au niveau des lamellipodes ; la phosphorylation au niveau de la Tyr-380, indépendamment de son activité protéolytique, favorise la migration cellulaire. Références associées : PMID:18216014, PMID:27109099
• La Caspase-8 est largement exprimée, avec les niveaux d'ARNm les plus élevés dans les leucocytes sanguins périphériques, la rate, le thymus et le foie, et une expression très faible dans le cerveau, les testicules et le muscle squelettique.
• De plus, la Caspase-8 clive PARP1 et PARP2 au cours de l'apoptose, et peut participer aux voies de mort cellulaire cytotoxique médiées par la Granzyme B. Références associées : PMID:8681376, PMID:8755496

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux résidus 200-300 du domaine catalytique de la Caspase-8 humaine ; cette région est présente dans le proenzyme pleine longueur et la grande sous-unité catalytique, donc l'anticorps peut détecter à la fois la forme non traitée et la forme clivée.
• Pour le Western blot, réalisez la SDS-PAGE dans des conditions réductrices ; attendez une bande majeure à ~55 kDa (pleine longueur) et, selon le traitement cellulaire, des bandes plus petites représentant les fragments actifs p18/p10. Incluez systématiquement des marqueurs de poids moléculaire.
• Cet anticorps est validé par KO ; envisagez d'utiliser des lysats de cellules knock-out pour la Caspase-8 comme contrôle négatif pour confirmer la spécificité des bandes dans votre système expérimental.
• Pour les applications ELISA, réalisez une titration en échiquier pour déterminer les concentrations optimales d'antigène de revêtement et d'anticorps ; validez par rapport à un étalon connu si disponible.
• Lors de l'étude de l'activation de la Caspase-8, traitez les cellules avec des inducteurs appropriés (par exemple TNF-α + cycloheximide pour l'apoptose, ou TNF-α + zVAD + mimétique de Smac pour la nécroptose) et surveillez la cinétique du clivage pour distinguer les modalités de mort cellulaire.
• La réactivité croisée n'est rapportée que pour l'homme ; si vous l'appliquez à d'autres espèces, alignez la séquence du peptide immunogène avec la Caspase-8 de l'organisme cible pour évaluer la réactivité potentielle.

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