[Validé KO] Anticorps monoclonal de lapin anti-AMPKα1 pour WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13131

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'AMPKα1

• Encodée par le gène PRKAA1, l'AMPKα1 (sous-unité catalytique alpha-1 de la protéine kinase activée par l'AMP 5') est également connue sous le nom de kinase ACACA, kinase HMGCR et kinase tau-protéine PRKAA1.
• Fonctionne comme la sous-unité catalytique de l'AMPK, un capteur énergétique clé qui active les voies productrices d'énergie et inhibe les processus consommateurs d'énergie en réponse à de faibles niveaux intracellulaires d'ATP.
  Références associées :
  PMID:17307971
  PMID:17712357
  PMID:24563466
• Phosphoryle directement et inactive les enzymes métaboliques impliquées dans la synthèse des lipides (par exemple, ACACA, ACACB, HMGCR, LIPE) et régule la synthèse du cholestérol.
  Références associées :
  PMID:34077757
• Module la transcription et la structure de la chromatine en phosphorylant des facteurs de transcription et des histones, y compris l'histone H2B au niveau de Ser-36, pour reprogrammer l'expression des gènes.
  Références associées :
  PMID:11518699
  PMID:11554766
  PMID:15866171
• Régule négativement la signalisation mTORC1 et stimule l'autophagie en cas de limitation des nutriments via la phosphorylation de TSC2, RPTOR, WDR24 et ULK1.
  Références associées :
  PMID:14651849
  PMID:18439900
  PMID:20160076
  PMID:21205641
  PMID:36732624
  PMID:37079666
• Se localise dans le cytoplasme, le noyau et les endosomes tardifs, ce qui correspond à ses rôles multifacettes dans la signalisation métabolique et le trafic intracellulaire.
• Mots-clés : L'AMPKα1 est une sérine/thréonine kinase liant l'ATP qui participe à l'autophagie, au métabolisme des lipides, à la régulation de la chromatine, au contrôle du cycle cellulaire et aux interactions hôte-virus.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 381-480, une région proche de l'extrémité C-terminale de l'AMPKα1 humain. Cela peut influencer la détection dans les mutants de troncation ou la reconnaissance spécifique de l'isoforme ; valider dans le système d'échantillon pertinent.
• Pour le transfert Western (WB), le poids moléculaire prédit est d'environ 64 kDa. Utilisez des inhibiteurs frais de protéases/phosphatases et envisagez des contrôles de charge tels que la β-actine.
• Les données de validation par knockout (KO) soutiennent la spécificité dans les échantillons humains ; les lysats de cellules KO sont recommandés comme contrôles négatifs.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), le prénettoyage des lysats et l'utilisation d'une étape de centrifugation à basse vitesse peuvent réduire la liaison non spécifique.
• En immunocytochimie/immunofluorescence (IF/ICC), la fixation avec du PFA à 4 % et la perméabilisation avec du Triton X-100 à 0,1 % sont des conditions de départ typiques.
• Les applications ELISA, IHC-P et IF/ICC peuvent nécessiter une optimisation de la récupération antigénique ou du revêtement protéique ; titrer l'anticorps primaire pour un rapport signal/bruit optimal.
• Une réactivité croisée avec l'AMPKα1 de souris et de rat est indiquée ; cependant, un alignement des séquences de la région immunogène est conseillé pour confirmer la cohérence entre les espèces.

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