Anticorps monoclonal de lapin anti-TFEB validé par KD pour WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P19484

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de TFEB

• TFEB (facteur de transcription EB), également appelé protéine 35 de la classe E à hélice-boucle-hélice basique (bHLHe35), appartient à la sous-famille MiT/TFE des facteurs de transcription à hélice-boucle-hélice basique à fermeture par leucine (bHLH-Zip), qui comprend MITF et TFE3.
• Il agit comme régulateur principal de la biogenèse lysosomale et de l'autophagie en se liant aux motifs CLEAR (Coordinated Lysosomal Expression and Regulation, 5′-GTCACGTGAC-3′) présents dans les promoteurs des gènes lysosomaux et autophagiques. Références associées : PMID:19556463, PMID:22692423
• L'activité de TFEB est étroitement contrôlée par la phosphorylation sensible aux nutriments : dans des conditions d'apport nutritionnel, la phosphorylation médiée par mTOR sur plusieurs résidus sérine retient TFEB dans le cytosol ; le jeûne ou un stress lysosomal inhibe mTOR, entraînant une déphosphorylation rapide et une translocation nucléaire. Références associées : PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015
• Dans le noyau, TFEB se dimérise avec lui-même ou d'autres membres de MiT/TFE pour activer la transcription des gènes cibles impliqués dans l'autophagie, le métabolisme lipidique, l'homéostasie énergétique et la défense immunitaire. Références associées : PMID:1748288, PMID:29146937
• De plus, TFEB joue un rôle dans l'immunité adaptative en régulant l'expression de CD40L dans les lymphocytes T, et dans l'immunité innée antibactérienne via une alkylation médiée par l'itaconate qui favorise sa localisation nucléaire et la biogenèse lysosomale. Références associées : PMID:35662396
• La localisation subcellulaire est dynamique : principalement cytoplasmique lorsqu'il est phosphorylé, il se transloque dans le noyau lors de son activation ; il peut également s'associer à la membrane lysosomale.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 50 à 173 du TFEB humain (NP_009093.1). Cette région se situe dans le domaine d'activation transcriptionnelle N-terminal, qui est relativement conservé chez l'homme, la souris et le rat, ce qui confirme la réactivité croisée rapportée. Pour les espèces non listées, un alignement de séquence est recommandé.
• Pour le Western blot, TFEB peut apparaître sous forme d'un doublet entre 44 et 53 kDa dû à une phosphorylation différentielle ou à un épissage alternatif ; l'utilisation d'inhibiteurs de phosphatases frais dans le tampon de lyse permet de préserver les isoformes phosphorylées. L'anticorps a été validé pour la spécificité après knockdown (KD Validé).
• En immunohistochimie (IHC-P), les conditions de récupération d'antigène doivent être optimisées pour votre type de tissu. Une coloration nucléaire et cytoplasmique peut être observée selon l'état d'activation de TFEB.
• Pour le ChIP, assurez-vous que les conditions de réticulation et de cisaillement sont optimisées pour votre type cellulaire ; l'anticorps doit enrichir efficacement les régions promotrices contenant des séquences CLEAR ou E-box.
• Réalisez des contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, lysats de TFEB-knockout, locus de gènes cibles connus) lors de la mise en place des tests.

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