Anticorps monoclonal de lapin anti-Sharpin validé KD pour WB, IF/ICC, ELISA - Q9H0F6

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Sharpin

• Sharpin (protéine interagissant avec le domaine RH associée à Shank), également connu sous le nom de SIPL1 (protéine de type 1 interagissant avec Shank), est un composant du complexe d'assemblage de chaînes d'ubiquitine linéaire (LUBAC). Le LUBAC conjugue des chaînes de polyubiquitine linéaires de manière tête-à-queue à des substrats, jouant un rôle clé dans l'activation de NF-kappa-B et la régulation de l'inflammation.
  Références associées :
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• Via le LUBAC, Sharpin médie l'ubiquitination linéaire d'IKBKG (NEMO) et de RIPK1, ce qui est essentiel pour les voies de signalisation canoniques de NF-kappa-B et JNK. Cette modification interfère avec la mort cellulaire induite par le TNF, empêchant ainsi l'inflammation.
  Références associées :
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• Dans l'immunité innée, le LUBAC contenant Sharpin conjugue des chaînes de polyubiquitine linéaires à la surface des bactéries envahissant le cytosol, formant un manteau d'ubiquitine qui sert de signal « mange-moi » pour la xénophagie et favorise l'activation de NF-kappa-B. Le LUBAC étend l'ubiquitine préexistante plutôt que d'initier l'ubiquitination.
  Références associées :
  PMID:28481331
• Sharpin participe également à la régulation de la signalisation Wnt canonique lors de l'angiogenèse, avec la déubiquitinase OTULIN, en modulant les événements d'ubiquitination linéaire.
  Références associées :
  PMID:23708998
• La protéine se localise principalement dans le cytoplasme et le cytosol, et se trouve également au niveau des synapses, ce qui correspond à ses rôles dans la transduction du signal et la fonction neuronale.
• L'expression est la plus élevée dans le muscle squelettique et le placenta, avec des niveaux plus faibles dans le cerveau, le cœur, le côlon, le thymus, la rate, le rein, le foie, l'intestin grêle, le poumon et les leucocytes du sang périphérique. Sharpin est régulé à la hausse dans divers tissus tumoraux, notamment le rein, le foie, l'ovaire et le pancréas.
• Sharpin contient des domaines à doigt de zinc et est une phosphoprotéine, indiquant une régulation par des modifications post-traductionnelles. Il est sujet à un épissage alternatif, générant de multiples isoformes.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'anticorps a été produit contre un fragment N-terminal (aa 1-126) du Sharpin humain. Cette région peut être conservée parmi les isoformes connues ; envisagez de vérifier la couverture des isoformes si applicable.
• Pour le Western blot (WB), une bande d'environ 40 kDa est attendue. Utilisez des lysats de contrôle positif tels que HeLa ou HEK293, qui expriment Sharpin.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), attendez-vous principalement à des profils de marquage cytoplasmique et éventuellement synaptique. Optimisez la fixation et la perméabilisation pour le type cellulaire d'intérêt.
• L'application ELISA est possible ; effectuez une titration appropriée de l'anticorps et utilisez la protéine Sharpin recombinante comme standard.
• Étant donné que Sharpin est impliqué dans la signalisation du TNF, une stimulation avec le TNF-alpha peut affecter sa localisation ou la formation de complexes, ce qui pourrait être étudié en utilisant cet anticorps.

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