Anticorps monoclonal lapin IKKβ pour IF/CCI et ELISA - O14920

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'IKKβ

• IKKβ (sous-unité bêta de l'inhibiteur de la kinase du facteur nucléaire kappa-B), également appelé IKK2 ou NFKBIKB, est une sérine/thréonine protéine kinase codée par le gène IKBKB. C'est un composant central du complexe IKK canonique qui active la signalisation NF-κB (PubMed:9346484). Références associées : PMID:9346484

• Il phosphoryle les inhibiteurs de NF-κB (IκB) sur deux résidus sérine critiques, déclenchant leur polyubiquitination et leur dégradation par le protéasome, ce qui permet à NF-κB de se translocaliser dans le noyau et d'activer la transcription génique (PubMed:20434986, PubMed:20797629, PubMed:21138416). Références associées : PMID:20434986, PMID:20797629, PMID:21138416

• Au-delà de IκB, IKKβ phosphoryle d'autres composants de la voie de signalisation, notamment NEMO/IKBKG, RELA, NFKB1, TBK1 et IKBKE, ce qui peut constituer un mécanisme de rétrocontrôle négatif pour empêcher la surproduction de médiateurs inflammatoires (PubMed:11297557, PubMed:14673179, PubMed:20410276). Références associées : PMID:11297557, PMID:14673179, PMID:20410276

• La kinase phosphoryle également FOXO3, médiant l'inactivation dépendante du TNF de ce facteur de transcription pro-apoptotique (PubMed:15084260), ainsi que d'autres substrats tels que NAA10, NCOA3, BCL10 et IRS1 (PubMed:17213322, PubMed:19716809). Références associées : PMID:15084260, PMID:17213322, PMID:19716809

• IKKβ est impliqué dans l'activation d'IRF5 par phosphorylation de son extrémité C-terminale pour stimuler l'homodimérisation et la translocation nucléaire (PubMed:25326418), et en réponse au LPS, il phosphoryle STAT1 sur la Thr-749, modulant l'expression des gènes inflammatoires (PubMed:32209697, PubMed:38621137). Références associées : PMID:25326418, PMID:32209697, PMID:38621137

• Au niveau sous-cellulaire, IKKβ se trouve dans le cytoplasme, le noyau et les radeaux membranaires. Il est fortement exprimé dans le cœur, le placenta, le muscle squelettique, le rein, le pancréas, la rate, le thymus, la prostate, les testicules et le sang périphérique.

• Les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation, l'hydroxylation, la phosphorylation, la S-nitrosylation et l'ubiquitination, ce qui reflète sa régulation stricte.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène utilisé pour générer cet anticorps monoclonal de lapin couvre les acides aminés 450-756, correspondant à la région C-terminale de l'IKKβ humain. Cette conception peut fournir une reconnaissance spécifique de l'IKKβ de pleine longueur dans des conformations dénaturées ou natives.
• Pour l'IF/CCI, envisagez d'utiliser des protocoles de fixation (par exemple 4 % de PFA) et de perméabilisation (par exemple 0,1 % de Triton X-100) appropriés, et validez l'anticorps dans des lignées cellulaires exprimant IKKβ telles que HeLa ou HEK293.
• Pour les applications ELISA, l'anticorps peut être utilisé pour la détection directe ou en sandwich ; l'optimisation de l'antigène de revêtement et de la dilution de l'anticorps est recommandée.
• L'anticorps étant produit chez le lapin, sélectionnez des anticorps secondaires compatibles pour la détection et tenez compte de la réaction croisée potentielle avec les immunoglobulines endogènes dans les échantillons tissulaires.
• Incluez toujours des contrôles positifs et négatifs (par exemple, des lysats de knock-out d'IKKβ ou des peptides de blocage) pour confirmer la spécificité.

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