mAb de lapin contre ESRα pour WB - P03372

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du récepteur des estrogènes

• Le récepteur alpha des estrogènes (ERα), également appelé ER-alpha, récepteur de l'estradiol et membre 1 du sous-groupe A du groupe 3 de la superfamille des récepteurs nucléaires (NR3A1), est codé par le gène ESR1 et appartient à la superfamille des récepteurs hormonaux nucléaires.
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, dont certaines sont dépourvues de domaines fonctionnels, qui peuvent moduler l'activité transcriptionnelle du récepteur de pleine longueur par liaison compétitive au ligand ou à l'ADN et hétérodimérisation. Références associées : PMID:10970861
• Lors de la liaison au 17β-estradiol, l'ERα subit un changement conformationnel qui favorise l'homodimérisation et la liaison directe aux éléments de réponse aux estrogènes (ERE) dans les promoteurs des gènes cibles, ou il s'associe à d'autres facteurs de transcription (par exemple AP-1, Sp1, NF-κB) pour réguler la transcription indépendante des ERE.
• L'ERα médie également la signalisation estrogénique rapide initiée par la membrane, activant diverses cascades de kinases, et est essentiel pour la régulation transcriptionnelle médiée par MTA1 de BRCA1 et BCAS3. Références associées : PMID:17922032
• Impliqué dans l'activation de NOS3 et la production d'oxyde nitrique endothélial, contribuant à l'homéostasie vasculaire. Références associées : PMID:21937726
• Il se localise principalement dans le noyau, mais on le trouve également dans le cytoplasme, la membrane cellulaire et l'appareil de Golgi ; sa distribution sous-cellulaire est régulée dynamiquement par la liaison au ligand et les modifications post-traductionnelles.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la phosphorylation, la palmitoylation, la méthylation, l'ubiquitination et la glycosylation, qui influencent la stabilité, la localisation et l'activité transcriptionnelle du récepteur.
• Il est largement exprimé dans de nombreux tissus, mais il est notamment absent de l'hypophyse. Références associées : PMID:10970861

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux résidus 495–595 de la région C-terminale de l'ESRα humain. Cette région peut être présente dans plusieurs isoformes, mais il est recommandé de vérifier la spécificité d'isoforme en utilisant des lignées cellulaires exprimant des variants d'épissage distincts.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire prédit est de 66 kDa ; utilisez des marqueurs pré-colorés pour confirmer la taille et optimisez les conditions de blocage pour réduire la liaison non spécifique.
• Lors de la réalisation d'immunoprécipitation (IP), préparez des lysats frais avec des inhibiteurs appropriés de protéases et de phosphatases pour préserver la stabilité de l'ERα.
• Pour l'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), optimisez soigneusement les paramètres de réticulation et de sonication, car les interactions de l'ERα avec la chromatine peuvent être transitoires et dépendantes de la stimulation par le ligand.
• En cytométrie en flux (coloration intracellulaire), incluez un contrôle isotypique et validez les protocoles de perméabilisation adaptés aux antigènes nucléaires.
• Pour l'ELISA, titrez l'anticorps en tant que réactif de capture ou de détection contre la protéine ERα recombinante pour établir les concentrations de travail optimales.
• Toutes les applications ont été validées sur des échantillons humains ; la réactivité avec d'autres espèces doit être confirmée expérimentalement.

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