EGFR Rabbit pAb pour WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P00533

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'EGFR

• L'EGFR est un récepteur tyrosine kinase qui se lie aux ligands de la famille EGF (par ex. EGF, TGFA, AREG, BTC, épiréguline, HBEGF) pour réguler la prolifération cellulaire, la survie et la différenciation. Références associées : PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960
• La liaison du ligand induit la dimérisation du récepteur et l'autophosphorylation, activant des cascades de signalisation en aval incluant les voies RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K/AKT, PLCγ/PKC, STAT et NF-κB. Références associées : PMID:27153536, PMID:11116146
• L'EGFR phosphoryle également des substrats non récepteurs tels que RGS16 (qui module la signalisation des protéines G) et MUC1 (qui renforce les interactions SRC/β-caténine). Références associées : PMID:11602604, PMID:11483589
• Le récepteur est principalement localisé sur la membrane cellulaire, mais il est transféré vers les endosomes, l'appareil de Golgi, le réticulum endoplasmique et le noyau, ce qui permet une signalisation régulée spatialement.
• De multiples modifications post-traductionnelles (phosphorylation, ubiquitination, hydroxylation, méthylation, palmitoylation) ajustent précisément l'activité, la stabilité et la distribution subcellulaire de l'EGFR.
• Il est exprimé de manière ubiquitaire dans les tissus normaux ; l'isoforme 2 issue d'un épissage alternatif est notamment détectée dans les cancers de l'ovaire et pourrait agir comme antagoniste de l'EGF.
• En plus de ses ligands endogènes, l'EGFR sert de récepteur hôte pour l'entrée du virus de l'hépatite C (VHC), facilitant l'internalisation virale.
• Reconnu comme proto-oncogène, la dérégulation de l'EGFR (surexpression ou mutations activatrices) est à l'origine de nombreux cancers, ce qui en fait une cible thérapeutique centrale.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (aa 1021–1210) se situe dans le domaine cytoplasmique, qui est conservé dans les conditions dénaturantes courantes ; envisagez d'utiliser une lyse RIPA standard et une SDS-PAGE réductrice pour le Western blotting, avec des lignées cellulaires positives (par ex. A431, HeLa) et négatives appropriées.
• Pour IHC-P, les protocoles de récupération d'antigène (par ex. tampon citrate pH 6,0 ou Tris-EDTA pH 9,0) peuvent nécessiter une optimisation, car l'EGFR est une glycoprotéine transmembranaire souvent très N-glycosylée.
• Bien qu'une réactivité croisée avec l'homme, la souris et le rat soit rapportée, nous recommandons de vérifier la réactivité spécifique à l'espèce et la spécificité du signal dans votre système expérimental, notamment lors de l'utilisation de modèles génétiquement modifiés.
• En raison du poids moléculaire élevé (~134 kDa), utilisez des gels SDS-PAGE à 8 % ou en gradient et optimisez les conditions de transfert (par ex. transfert humide overnight ou semi-sec avec faible concentration de méthanol) pour le Western blotting.
• Dans les expériences d'immunoprécipitation (IP), le prétraitement de clarification des lysats et l'utilisation d'un contrôle isotypique d'IgG de lapin peuvent aider à réduire la liaison non spécifique.
• Lors du développement d'un ELISA, le couplage de cet anticorps polyclonal avec un anticorps de capture monoclonal peut améliorer la sensibilité du test ; réalisez des titrations en échiquier pour déterminer les concentrations optimales.

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