eEF2 mAb de lapin - P13639

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'eEF2

• Catalyse l'étape de translocation ribosomique dépendante du GTP lors de l'élongation de la traduction. Au cours de cette étape, le ribosome passe de l'état pré-translocationnel (PRE) à l'état post-translocationnel (POST) : le peptidyl-ARNt nouvellement formé lié au site A et l'ARNt déacylé lié au site P se déplacent respectivement vers les sites P et E, accompagnés du déplacement de l'ARNm et de changements conformationnels du ribosome. Références associées : PMID:26593721
• eEF2 est une protéine de liaison au GTP de 95 kDa très conservée appartenant à la famille des facteurs d'élongation G, essentielle à la biosynthèse des protéines.
• Il se localise principalement dans le cytoplasme, où il exerce sa fonction canonique, mais il est également détecté dans le noyau, ce qui suggère des rôles extra-traductionnels.
• Les modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation, l'ADP-ribosylation, la méthylation et la conjugaison ubiquitine-like, régulent l'activité et la stabilité d'eEF2 en réponse aux signaux cellulaires.
• Les mutations du gène EEF2 causent l'ataxie spinocérébelleuse de type 26 (SCA26), une maladie neurodégénérative caractérisée par une incoordination motrice progressive.
• Les études structurelles révèlent des domaines de liaison aux nucléotides conservés et des conformations dynamiques essentiels à la liaison au ribosome et à la translocation.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène cible la région C-terminale (aa 759-858), ce qui peut faciliter la détection de l'eEF2 complet et des produits de clivage potentiels ; vérifiez la taille de la bande à environ 95 kDa dans des lysats représentatifs.
• Pour le Western blot, utilisez un gel SDS-PAGE standard (par exemple 8-10 %) et une membrane de PVDF ou de nitrocellulose ; envisagez d'optimiser les conditions de blocage (par exemple 5 % de lait écrémé ou de BSA) pour réduire le bruit de fond.
• Pour IHC-P et IF/ICC, un démasquage des antigènes (tampon citrate ou EDTA) et une perméabilisation peuvent être nécessaires ; testez les protocoles de fixation (formaldéhyde vs méthanol) pour équilibrer la préservation de la morphologie et l'accessibilité des épitopes.
• La performance en ELISA dépend du format du test ; en tant qu'anticorps monoclonal, il peut servir de réactif de détection ou de capture ; validez la linéarité et la sensibilité avec de l'eEF2 recombinant ou des lysats cellulaires.
• La réactivité croisée avec la souris et le rat permet des recherches translationnelles sur les organismes modèles courants ; confirmez la spécificité par des contrôles de extinction par siRNA ou de knock-out dans votre système expérimental.

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