Anticorps polyclonal de lapin anti-EED pour WB, IF, IP, ELISA - O75530

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'EED

• La protéine Polycomb EED (protéine de développement de l'ectoderme embryonnaire), également désignée HEED, COGIS et WAIT-1, est un composant central du complexe de répression Polycomb 2 (PRC2). L'épissage alternatif et l'initiation alternative produisent plusieurs isoformes.
• En tant que partie du complexe PRC2/EED-EZH2, l'EED méthyle l'histone H3 sur la lysine-9 et la lysine-27, conduisant au silence transcriptionnel des gènes cibles tels que HOXC8, HOXA9, MYT1 et CDKN2A.
• L'EED reconnaît l'histone H1 triméthylée sur la lysine-26 (H1K26me3), ce qui inhibe l'activité méthyltransférase du PRC2 sur l'H3K27 nucléosomique, tandis que la reconnaissance de H3K27me3 propage la marque répressive.
• Le complexe PRC2/EED-EZH2 peut également recruter des ADN méthyltransférases, établissant un lien fonctionnel entre la modification des histones et la méthylation de l'ADN pour une répression génique stable.
• L'EED est localisée dans le noyau et s'associe aux chromosomes, ce qui est cohérent avec son rôle dans la régulation de la chromatine.
• Elle fait l'objet de multiples modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la phosphorylation et la méthylation, qui peuvent moduler son activité et ses interactions.
• L'EED est largement exprimée dans les tissus humains, avec des niveaux notablement élevés observés dans les cancers du sein et du côlon, ce qui confirme son implication dans l'oncogenèse.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène couvre les 400 acides aminés N-terminaux de l'EED humaine ; cette région peut permettre de détecter la protéine pleine longueur et certaines isoformes. Validez la détection de tout variant d'épissage spécifique dans votre système expérimental.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire prédit est d'environ 50 kDa. Confirmez la taille de la bande avec des témoins positifs et négatifs appropriés.
• Une réactivité croisée est signalée pour l'humain, la souris et le rat. Vérifiez la réactivité avec d'autres espèces si nécessaire par alignement de séquence de l'immunogène.
• En immunofluorescence/ICC, effectuez une fixation standard (par exemple, 4 % de PFA) et une perméabilisation (par exemple, 0,1 % de Triton X-100). Une coloration nucléaire est attendue.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), utilisez des billes de protéine A ou G et optimisez le rapport anticorps/lysat. Pré-nettoyez les lysats pour réduire le bruit de fond.
• La compatibilité ELISA est indiquée ; titrez l'anticorps et utilisez la protéine EED recombinante ou un peptide comme antigène de revêtement.
• Compte tenu de la surexpression de l'EED dans certains cancers, incluez des lignées cellulaires cancéreuses pertinentes (par exemple, sein, côlon) comme témoins positifs.

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