DNMT1 Lapin pAb pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - P26358

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de DNMT1

• DNMT1 (ADN (cytosine-5)-méthyltransférase 1) est la méthyltransférase de maintenance principale qui copie les motifs de méthylation de l'ADN vers le brin nouvellement synthétisé lors de la réplication de l'ADN, assurant ainsi l'héritage épigénétique (PubMed:17200670, PubMed:21745816). Références connexes : PMID:17200670, PMID:21745816

• DNMT1 méthyle préférentiellement les dinucléotides CpG hémiméthylés et est essentiel pour la propagation fidèle des motifs de méthylation lors de la division cellulaire (PubMed:21745816, PubMed:26070743). Références connexes : PMID:21745816, PMID:26070743

• Au-delà de la maintenance couplée à la réplication, DNMT1 s'associe à la chromatine pendant les phases G2 et M pour maintenir la méthylation de l'ADN indépendamment de la réplication (PubMed:21745816). Références connexes : PMID:21745816

• DNMT1 médie la répression transcriptionnelle directement par interaction avec HDAC2 et coordonne la méthylation de l'ADN avec les modifications des histones (PubMed:10888872, PubMed:16357870). Références connexes : PMID:10888872, PMID:16357870

• Dans les cellules cancéreuses colorectales, DNMT1 forme un complexe corépresseur qui médie l'hyperméthylation du promoteur induite par l'oncogène KRAS et le silence des gènes suppresseurs de tumeurs (PubMed:24623306). Il maintient également un état de répression transcriptionnelle des gènes dans les cellules souches embryonnaires indifférenciées (PubMed:24623306). Références connexes : PMID:24623306

• DNMT1 est exprimé de manière ubiquitaire, avec les niveaux les plus élevés dans les tissus fœtaux, le cœur, le rein, le placenta et les cellules mononucléaires du sang périphérique, et des niveaux plus faibles dans la rate, le poumon, le cerveau, l'intestin grêle, le côlon, le foie et le muscle squelettique. L'isoforme 2 est moins abondante que l'isoforme 1.

• DNMT1 contient un domaine de type doigt de zinc CXXC et subit des modifications post-traductionnelles régulatrices telles que l'acétylation, la phosphorylation et la méthylation.

• DNMT1 se localise dans le noyau et s'associe aux chromosomes, ce qui est cohérent avec son rôle dans la méthylation de maintenance et la régulation transcriptionnelle.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre la région C-terminale (aa 760-1109) du DNMT1 humain, qui englobe le domaine méthyltransférase catalytique ; cette conception cible le site actif et peut améliorer la détection du DNMT1 pleine longueur.
• Pour le western blot, attendez-vous à une bande à environ 183 kDa ; l'utilisation d'un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple, 6–8 %) et des temps de transfert prolongés peuvent aider à résoudre cette protéine de poids moléculaire élevé.
• Les niveaux d'expression de DNMT1 varient selon les types de cellules et les tissus ; validez les performances de l'anticorps dans votre système d'échantillon spécifique en utilisant des témoins positifs (par exemple, HeLa, HEK293) et négatifs appropriés.
• Pour l'immunoprécipitation, optimisez la concentration de l'anticorps et envisagez un couplage croisé aux billes pour réduire l'interférence de la chaîne lourde des IgG à environ 50 kDa.
• En immunofluorescence/ICC, la perméabilisation nucléaire (par exemple, avec Triton X-100) et une fixation appropriée sont nécessaires pour l'accès aux antigènes nucléaires ; un marquage simultané avec un marqueur nucléaire peut confirmer la localisation.

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