Anticorps polyclonal de lapin DiMethyl-Histone H3-K79 (Q16695/P68431) – Validé pour WB, IHC-P, ChIP-seq

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

• L'histone H3 est un composant central du nucléosome, essentiel pour l'enroulement et la compaction de l'ADN en chromatine. Cette organisation structurelle régule l'accessibilité de l'ADN et joue un rôle central dans la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication et la stabilité chromosomique. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

• L'histone H3 existe en de multiples variants. L'histone H3.1 canonique (codée par des gènes tels que H3C1–H3C12) est exprimée de manière ubiquitaire, tandis que le variant spécifique des testicules H3.1t (H3-4) est exprimé principalement dans les cellules testiculaires. Les deux partagent une forte similarité de séquence, incluant le résidu K79 conservé. Références associées : UniProt Q16695 (spécificité tissulaire), UniProt P68431

• Les modifications post-traductionnelles (MPT) sur l'histone H3, telles que la méthylation, l'acétylation, la phosphorylation et d'autres, constituent le "code histone" qui régit la dynamique de la chromatine. La lysine 79 (K79) est un site notable pour la méthylation (mono-, di- et triméthylation), la diméthylation (H3K79me2) étant impliquée dans la régulation transcriptionnelle, la réparation de l'ADN et le silençage télomérique. Références associées : Pour les modifications associées, voir PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588

• Cet anticorps a été produit contre un peptide synthétique portant la K79 diméthylée. Il est conçu pour détecter spécifiquement l'état de diméthylation de l'histone H3 au niveau de K79, avec une large réactivité prédite à travers de nombreuses espèces en raison de la conservation de la séquence. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

• Localisation subcellulaire : L'histone H3 est principalement localisée dans le noyau et sur les chromosomes, où elle fait partie du cœur du nucléosome. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

Guide expérimental et conseils techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été généré en utilisant un peptide synthétique contenant la K79 diméthylée de l'histone H3 humaine (NP_003520.1). Pour des anticorps spécifiques de modifications similaires, envisagez d'utiliser des peptides synthétiques avec des modifications définies pour garantir une haute spécificité.
• Western blot (WB) : L'histone H3 a un poids moléculaire prédit d'environ 15 kDa. Pour de meilleurs résultats, utilisez des histones extraites à l'acide ou des lysats cellulaires totaux, et optimisez le pourcentage de gel et les conditions de transfert pour les protéines de faible poids moléculaire. Validez dans votre système d'échantillon.
• Immunohistochimie (IHC-P) et Immunofluorescence (IF/ICC) : Une récupération antigénique (par exemple, tampon citrate) peut être nécessaire. Testez une gamme de dilutions d'anticorps ; notez que la fixation et l'inclusion des tissus peuvent affecter l'accessibilité de l'épitope.
• Immunoprécipitation de la chromatine (ChIP/ChIP-seq) : Cet anticorps est listé pour les applications ChIP et ChIP-seq. Assurez-vous d'une réticulation appropriée (par exemple, formaldéhyde) et d'un cisaillement de la chromatine en fragments d'environ 200 à 500 pb. Incluez des contrôles positifs et négatifs appropriés pour l'état de méthylation.
• ELISA et IP : Les protocoles standards sont applicables. Pour l'IP, un prénettoyage et l'utilisation de tampons de lyse appropriés (par exemple, RIPA pour l'extraction des histones) peuvent améliorer le rapport signal/bruit.
• Réactivité croisée : L'anticorps reconnaît l'histone H3 humaine, murine et de rat, avec un large spectre d'espèces supplémentaires prédit sur la base de l'homologie de séquence. Vérifiez toujours la réactivité croisée dans votre espèce cible.
• Généralités : Comme pour tout anticorps polyclonal, tenez compte de la variabilité entre lots et revalidez lors du changement de lot. Stockez comme recommandé (expédié sur sac de glace) et évitez les cycles répétés de congélation-décongélation.

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