Anticorps polyclonal de lapin anti-DiMethyl-Histone H3-K4 (Q16695/P68431) pour WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H3.1t/Histone H3.1

L'histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Avec les histones H2A, H2B et H4, elle forme un octamère autour duquel s'enroulent 147 paires de bases d'ADN, compactant le génome et régulant l'accessibilité de l'ADN. Cette structure est essentielle pour les processus utilisant l'ADN comme matrice, y compris la transcription, la réplication, la réparation et la stabilité chromosomique.

La variante canonique de l'histone H3.1 est codée par plusieurs gènes (par exemple, HIST1H3A à HIST1H3J) et est déposée sur l'ADN nouvellement répliqué pendant la phase S. En revanche, l'isoforme H3.1t (gène H3-4 / HIST3H3) est une variante spécifique des testicules, exprimée principalement dans les cellules testiculaires et potentiellement impliquée dans le remodelage de la chromatine pendant la spermatogenèse.

L'histone H3 subit de nombreuses modifications post-traductionnelles (MPT) sur sa queue N-terminale flexible, formant un "code histone" régulateur complexe. Les MPT connues comprennent la méthylation, l'acétylation, la phosphorylation, l'ADP-ribosylation, l'ubiquitination, et d'autres. La méthylation de la lysine 4 (H3K4) est une marque clé : la diméthylation (H3K4me2) est associée à des éléments régulateurs de gènes actifs ou en attente, tels que les promoteurs et les amplificateurs.

Cet anticorps a été produit contre un peptide synthétique correspondant à la queue N-terminale (acides aminés 1-100) de l'histone H3 humaine, une région qui inclut le résidu K4 et qui est hautement conservée entre les espèces. L'anticorps reconnaît spécifiquement la forme diméthylée de K4.

L'histone H3 se localise dans le noyau et est un composant structurel des chromosomes.

Références associées : PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène englobe la queue N-terminale de l'histone H3, garantissant la reconnaissance de la région contenant le résidu K4. Pour une détection spécifique de la méthylation, validez avec des tests de blocage par peptide appropriés ou des contrôles d'histone mutante.
• Pour le Western blot (WB), des extraits enrichis en histones ou des lysats cellulaires totaux peuvent être utilisés. La bande attendue est d'environ 15 kDa. Envisagez d'utiliser une membrane de transfert de haute qualité et un blocage prolongé pour minimiser le bruit de fond.
• En immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) et ChIP-seq, cet anticorps peut être adapté pour cartographier la distribution de H3K4me2. Incluez des locus de contrôle positif (par exemple, promoteurs actifs) et des locus de contrôle négatif (par exemple, régions intergéniques) pour évaluer la spécificité. Lors de la réalisation d'un ChIP-seq, la préparation de la bibliothèque et la profondeur de séquençage doivent être optimisées selon le plan expérimental spécifique.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), la récupération antigénique (par exemple, tampon citrate pH 6.0 avec chauffage) et la perméabilisation peuvent améliorer la détection. Testez différentes méthodes de fixation (par exemple, formol vs méthanol) car elles peuvent affecter la disponibilité de l'épitope.
• L'anticorps présente une réactivité croisée prédite avec l'humain, la souris, le rat et d'autres espèces en raison de la forte conservation de séquence de l'extrémité N-terminale de H3. Si une nouvelle espèce est utilisée, envisagez un alignement de séquences pour confirmer la conservation de l'épitope et réalisez une expérience de contrôle positif.
• Les anticorps spécifiques de la méthylation peuvent présenter une réactivité croisée avec d'autres marques de méthyl-lysine. Pour confirmer la spécificité, incluez des expériences de blocage compétitif par peptide en utilisant des peptides diméthyl-K4 et d'autres peptides modifiés.
• Les dilutions optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque test.

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