Anticorps polyclonal de lapin DiMethyl-Histone H3-K27 (Q16695/P68431) pour la recherche épigénétique & ChIP

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité fondamentale de la chromatine. Les nucléosomes enveloppent et compactent l'ADN, limitant son accessibilité à la machinerie cellulaire et jouant ainsi un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique.

L'histone H3 est soumise à une vaste gamme de modifications post-traductionnelles (MPT), notamment l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation, la citrullination et bien d'autres, collectivement appelées le "code histone". Ces modifications régulent dynamiquement la structure de la chromatine et l'expression des gènes. La queue N-terminale de l'histone H3 est particulièrement riche en résidus modifiables, la lysine 27 (K27) étant un site critique pour les événements de méthylation. La di-méthylation de H3K27 (H3K27me2) est associée à la répression transcriptionnelle et au maintien de l'hétérochromatine.

Le génome humain code plusieurs variants de l'histone H3. Q16695 (H3-4, également appelé H3.1t) est une histone spécifique des testicules principalement exprimée dans les cellules testiculaires, tandis que P68431 (H3C1/H3C2/H3C3/H3C4/H3C6/H3C7/H3C8/H3C10/H3C11/H3C12) représente les variants canoniques H3.1 dépendants de la réplication exprimés dans les cellules somatiques. Les deux variants sont hautement conservés et partagent des séquences N-terminales identiques où se situe K27. Ils se localisent exclusivement dans le noyau et sur les chromosomes, où ils forment une partie intégrante des fibres de chromatine.

Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot (WB), une bande unique d'environ 15 kDa correspondant à l'histone H3 est attendue. Utilisez des contrôles positifs et négatifs appropriés pour confirmer l'identité de la bande et la spécificité de la di-méthylation.
• Pour le ChIP et le ChIP-seq, optimisez les conditions de réticulation (par exemple, formaldéhyde) et de fragmentation de la chromatine. Envisagez de valider l'enrichissement de loci cibles connus de H3K27me2 en utilisant la qPCR ou un séquençage parallèle.
• L'anticorps présente une réactivité croisée avec l'homme, la souris et le rat, et une large gamme de réactivité est prédite. Cependant, il est conseillé de valider ses performances dans l'espèce et le tissu spécifiques d'intérêt avant des expériences à grande échelle.
• Pour l'ELISA et le dot blot (DB), titre l'anticorps et incluez des étapes de blocage pour minimiser la liaison non spécifique ; le peptide immunogène peut servir de contrôle positif.
• En immunohistochimie (IHC) et immunofluorescence (IF/ICC), notez que l'histone H3 est nucléaire ; un contre-colorant (par exemple, DAPI) peut aider à visualiser la localisation nucléaire. Une récupération antigénique peut être nécessaire.

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