Ac pAb de lapin DiMethyl-Histone H3-K14 (Q16695/P68431) pour WB, IF/ICC, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Les nucléosomes enroulent et compactent l'ADN, limitant ainsi l'accessibilité de l'ADN aux machineries cellulaires qui nécessitent l'ADN comme matrice. Les histones jouent un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. L'accessibilité de l'ADN est régulée par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (le « code des histones ») et du remodelage des nucléosomes.

Cet anticorps reconnaît la forme diméthylée de la lysine 14 (K14) sur l'histone H3 humaine. Deux isoformes majeures sont représentées par les accès SWISS Q16695 (Histone H3.1t, exprimée dans les cellules testiculaires) et P68431 (Histone H3.1, une variante canonique). Les deux isoformes se localisent dans le noyau et sur les chromosomes.

La lysine 14 est un résidu critique au sein de la queue N-terminale de l'histone H3 qui subit des modifications post-traductionnelles dynamiques, notamment l'acétylation et la méthylation, qui influencent la structure de la chromatine et l'expression des gènes. La diméthylation de la K14 est associée à des résultats transcriptionnels spécifiques et fait partie du paysage régulateur épigénétique plus large.

Références connexes : La fonction centrale du nucléosome est soutenue par de nombreuses études structurelles et biochimiques. Pour des informations spécifiques aux modifications, voir : PMID:19608861, PMID:17194708.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide diméthylé synthétique autour de la K14. Pour garantir la spécificité de la diméthylation, envisagez de valider l'anticorps par rapport au peptide K14 non modifié ou aux peptides avec une mono-/tri-méthylation sur la K14.
• Pour le transfert Western (Western blot), une dilution de départ peut être optimisée en utilisant des fractions d'extrait nucléaire ; la bande attendue est d'environ 15 kDa. Confirmez la disparition de la bande dans les échantillons traités avec une déméthylase K14 si elle est disponible.
• En immunofluorescence (IF/ICC), les conditions de fixation et de perméabilisation peuvent impacter l'accessibilité de l'épitope. Il est conseillé de tester la fixation au méthanol par rapport au formaldéhyde et d'inclure un témoin de compétition peptidique.
• Pour l'ELISA, utilisez le peptide immunogène comme témoin positif et un peptide K14 non modifié comme témoin négatif pour vérifier la liaison spécifique à la modification.
• L'anticorps est prédit pour réagir de manière croisée avec un large éventail d'espèces en raison de la conservation de la séquence de la queue N-terminale de l'histone H3. Validez dans l'espèce d'intérêt en utilisant des témoins positifs et négatifs appropriés.

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