PARP clivé (Asp214) pAc Lapin - Q921K2

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la poly [ADP-ribose] polymérase

• Enzyme clé de réparation de l'ADN : PARP1 médie la poly-ADP-ribosylation (PARylation) des protéines cibles en réponse aux dommages de l'ADN, recrutant la machinerie de réparation sur les cassures simple-brin.
• Marqueur d'apoptose : Au cours de l'apoptose, la caspase-3 et la caspase-7 clivent la PARP1 pleine longueur (113 kDa) au niveau de l'Asp214, générant un fragment de 89 kDa qui se lie de manière irréversible aux cassures de l'ADN et bloque la réparation, favorisant la mort cellulaire programmée.
• Apoptose médiée par AIFM1 : Le fragment clivé subit une auto-PARylation et agit comme un transporteur de poly-ADP-ribose, déclenchant la translocation de l'AIFM1 des mitochondries vers le noyau pour induire une fragmentation à grande échelle de l'ADN.
• Distribution subcellulaire : Se localise principalement dans le noyau (nucléoplasme et nucléole) et s'associe à la chromatine ; après clivage, le fragment transloque vers le cytosol.
• Domaines fonctionnels : Contient des motifs doigts de zinc pour la liaison à l'ADN, un domaine d'automodification et un domaine catalytique C-terminal qui utilise le NAD+ comme substrat.
• Famille de gènes : Appartient à la superfamille PARP ; Parp1 (Adprt1) est le membre fondateur. Il est également connu sous le nom d'ADPRT, ARTD1 et PPOL.
• Modifications post-traductionnelles : Une auto-poly-ADP-ribosylation extensive module sa propre activité et sert d'échafaudage pour d'autres facteurs de réparation. Le clivage par les caspases est un événement régulateur clé.
• Mots-clés : ADP-ribosylation, enzyme allostérique, apoptose, chromosome, cytoplasme, dommage à l'ADN, réparation de l'ADN, liaison à l'ADN, glycosyltransférase, immunité, immunité innée, liaison isopeptidique, liaison métallique, NAD, nucléotidyltransférase, noyau, identification protéomique, répétition, transcription, régulation de la transcription, transférase, zinc, doigt de zinc.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les résidus 201-300 du PARP1 de souris, ce qui inclut le site de clivage de la caspase-3/7 à l'Asp214. Cette conception permet une reconnaissance spécifique de la forme clivée dans les expériences d'apoptose.
• Pour le Western blotting (WB), utilisez des lysats de cellules ou de tissus de souris traités avec des inducteurs d'apoptose (par exemple, staurosporine, étoposide) pour amplifier le signal. La protéine pleine longueur migre à environ 113 kDa, tandis que le fragment clivé apparaît à environ 89 kDa.
• Pour l'ELISA, envisagez d'utiliser l'anticorps comme réactif de capture ou de détection dans des dosages sandwich ; le couplage avec un anticorps pan-PARP permet de différencier le PARP clivé du PARP total.
• Validez la spécificité de l'anticorps en utilisant des lignées cellulaires avec knockout du PARP1 ou des contrôles avec inhibiteurs de caspases pour confirmer que la bande détectée disparaît dans des conditions non apoptotiques.
• Évitez les cycles répétés de congélation-décongélation pour maintenir l'intégrité de l'anticorps ; un stockage à court terme à 4°C est acceptable, mais un stockage à long terme est recommandé à -20°C ou moins.

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