CAST Rabbit pAb pour WB, ELISA - P20810

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la Calpastatine

• La Calpastatine (CAST) est un inhibiteur endogène spécifique de la calpaïne, une famille de protéases à cystéine dépendantes du calcium (EC 3.4.22.-) impliquées dans le remodelage du cytosquelette, la transduction du signal et l'apoptose.
• En se liant étroitement et en inhibant la calpaïne, la calpastatine régule l'activité des protéases dans le tissu musculaire, jouant un rôle critique dans l'attendrissement de la viande post-mortem et possiblement dans le contrôle de la dégradation des protéines musculaires dans les cellules vivantes.
• Le gène CAST subit un épissage alternatif étendu, générant de multiples isoformes avec des distributions tissulaires et des capacités inhibitrices distinctes.
• La calpastatine contient quatre domaines inhibiteurs répétitifs (domaines L), chacun capable d'inhiber la calpaïne de manière indépendante, ainsi qu'un domaine N-terminal L et une queue C-terminale ; cette architecture à répétitions sous-tend sa puissante inhibition coopérative des protéases.
• Les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation, la phosphorylation, l'ubiquitination et la formation de liaisons iso-peptidiques, qui peuvent moduler la stabilité, la localisation et l'efficacité inhibitrice de la protéine.
• L'expression de la calpastatine est détectée dans un large éventail de tissus, avec une présence caractérisée dans le spermatozoïde (comme composant BS-17) et une association de la maladie avec la kératodermie palmoplantaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 510 à 610 du CAST humain ; la réactivité de l'anticorps peut être influencée par l'utilisation d'isoformes ou par des modifications post-traductionnelles dans cette région.
• Pour le Western blot, envisagez d'optimiser la concentration de l'anticorps primaire (par exemple, 1:500–1:2000) et d'utiliser des témoins positifs appropriés tels que des lysats de HeLa, HEK293 ou de muscle squelettique, où la calpastatine est exprimée de manière endogène.
• L'anticorps présente une réactivité croisée avec la souris et le rat ; vérifiez les profils de bandes chez ces espèces, car les poids moléculaires peuvent différer légèrement en raison de la variation des isoformes.
• Pour l'ELISA, titrez l'anticorps contre le peptide immunogène ou la protéine recombinante pleine longueur pour établir les concentrations de travail ; utilisez des étapes de blocage et de lavage appropriées pour réduire le bruit de fond.
• Comme il s'agit d'un anticorps polyclonal, il peut détecter plusieurs isoformes de calpastatine ; confirmez la spécificité par des expériences de knockdown par ARNsi ou de surexpression dans des modèles cellulaires pertinents.

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