Anticorps monoclonal de lapin anti-CD45 de souris conjugué à la biotine pour la cytométrie en flux - P06800

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD45 (PTPRC)

• CD45 (protéine tyrosine phosphatase C de type récepteur) est un antigène leucocytaire commun (L-CA) exprimé de manière ubiquitaire, également connu sous les noms de Ly-5 et T200. L’épissage alternatif génère plusieurs isoformes, dont B220 (CD45R), principalement présent sur les lymphocytes B.
• Il contient deux domaines intracellulaires de protéine tyrosine phosphatase (PTP) ; le premier domaine possède une activité enzymatique, tandis que le second module la spécificité de substrat.
• CD45 est essentiel à l’activation des lymphocytes T par l’intermédiaire du récepteur antigénique, en agissant comme régulateur positif de la coactivation lors de sa liaison à DPP4.
• Lors de l’activation des lymphocytes T, CD45 recrute et déphosphoryle SKAP1 et FYN, et déphosphoryle également LYN afin de moduler son activité kinase.
• Aux interfaces entre les cellules présentatrices d’antigène et les lymphocytes T, CD45 interagit avec CLEC10A sur les cellules dendritiques immatures, qui reconnaît l’antigène Tn modifiant CD45 sur les lymphocytes T effecteurs, ajustant ainsi le seuil d’activation afin de limiter l’autoréactivité.
• Il se localise sur la membrane cellulaire, dans les radeaux membranaires et au niveau de la synapse immunologique, ce qui concorde avec son rôle dans la transduction du signal.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent une forte glycosylation liée à l’azote ainsi qu’une phosphorylation des résidus sérine/thréonine.
• CD45 appartient à la famille des protéines tyrosine phosphatases et à la classe I des PTP de type récepteur.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Pour la cytométrie en flux, titrez l’anticorps biotinylé sur une gamme de concentrations (par exemple, 0,1 à 5 µg/test) afin de déterminer l’indice de coloration optimal avec votre modèle cellulaire spécifique et votre conjugué secondaire à base de streptavidine.
• Incluez une coloration avec un contrôle d’isotype approprié afin d’évaluer la liaison de fond, en particulier lors de l’utilisation de systèmes de détection amplifiés tels que la streptavidine-PE ou la streptavidine-APC.
• Avant utilisation, validez l’anticorps dans la population leucocytaire de souris concernée (par exemple, splénocytes, cellules des ganglions lymphatiques ou cellules mononucléées du sang périphérique) afin de confirmer l’expression et la résolution attendues.
• La conjugaison à la biotine offre une grande flexibilité ; envisagez d’utiliser des conjugués de streptavidine adaptés aux lasers et aux filtres de votre instrument pour les panels à une ou plusieurs couleurs.
• Pour la détection indirecte, assurez-vous d’effectuer des étapes de lavage suffisantes après l’incubation primaire afin d’éliminer l’anticorps non lié et de minimiser le signal non spécifique.

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