Anticorps Monoclonal Anti-CD8a Biotinylé pour Cytométrie en Flux - P01732

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du CD8a (chaîne alpha de la glycoprotéine de surface CD8 des lymphocytes T)

• Le CD8a est une glycoprotéine membranaire intégrale qui agit comme un corécepteur pour les molécules de classe I du CMH sur les lymphocytes T, permettant la reconnaissance des antigènes peptidiques dérivés de protéines cytosoliques.
• Il interagit simultanément avec le récepteur des lymphocytes T (TCR) et le CMH de classe I sur les cellules présentatrices d'antigène, recrutant la kinase Src LCK pour initier des cascades de signalisation conduisant à l'activation des lymphocytes T, à la production de lymphokines et à la cytotoxicité.
• Le CD8a forme soit des hétérodimères avec le CD8B sur les lymphocytes T d'origine thymique, soit des homodimères (CD8a/CD8a) sur un sous-ensemble de cellules NK, de lymphocytes T mémoire, de lymphocytes intra-épithéliaux, de monocytes et de cellules dendritiques.
• La protéine est localisée à la membrane cellulaire, mais une forme sécrétée existe également, probablement issue d'un épissage alternatif.
• Les principales modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation, la formation de ponts disulfures et la palmitoylation, qui sont importantes pour sa structure et son association membranaire.
• Le CD8a possède un domaine de type immunoglobuline et fait partie du système immunitaire adaptatif, jouant un rôle dans la sélection thymique et la génération de lymphocytes T CD8 mémoire.
• Les variantes pathologiques du gène CD8A sont associées à des immunodéficiences, soulignant son rôle critique dans la défense immunitaire.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'anticorps est généré contre une protéine recombinante correspondant au domaine extracellulaire (aa 22-182) du CD8A humain, qui inclut la région critique de liaison au CMH de classe I ; envisagez de confirmer la spécificité en utilisant des lignées cellulaires exprimant le CD8a et des lignées CD8a-knockout en cytométrie en flux.
• Pour les applications de cytométrie en flux, les concentrations optimales de coloration doivent être titrées à l'aide de cellules primaires pertinentes (par exemple, PBMC humains ou lymphocytes de singe cynomolgus) en raison de la variabilité de la densité antigénique ; un système de détection biotine-streptavidine peut amplifier la sensibilité.
• La réactivité croisée avec le CD8a de singe cynomolgus permet des études translationnelles, mais vérifiez les performances dans votre système d'essai spécifique, car la conservation de l'épitope peut varier.
• Puisque le CD8a est exprimé sur plusieurs sous-ensembles immunitaires, les stratégies de gating doivent incorporer des marqueurs supplémentaires (par exemple, CD3, CD4) pour distinguer les lymphocytes T cytotoxiques des cellules NK et des populations mémoire.
• Pour le coloration intracellulaire, la perméabilisation peut affecter l'accessibilité de l'épitope ; envisagez de tester les protocoles de fixation/perméabilisation avec des témoins positifs et négatifs.

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