Anticorps monoclonal de lapin anti-EGFR humain conjugué à l’APC/Cyanine7 pour cytométrie en flux - P00533

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’EGFR

• L’EGFR est une tyrosine kinase réceptrice (RTK) de la famille ErbB, également connue sous le nom de HER1 ou c-ErbB-1, codée par le gène EGFR.
• Il lie les ligands de la famille de l’EGF (par ex. EGF, TGF-alpha, AREG, épigène, bêtacelluline, épiréguline, HB-EGF), qui déclenchent la dimérisation du récepteur et son autophosphorylation. Références associées : PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• L’EGFR activé transmet des signaux par les cascades RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STAT et NF-kappa-B. Références associées : PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:11116146
• Il phosphoryle directement RGS16 et MUC1, établissant un lien avec la signalisation des GPCR et l’adhésion cellulaire. Références associées : PMID:11602604 PMID:11483589
• L’EGFR régule positivement la migration cellulaire par interaction avec CCDC88A/GIV. Références associées : PMID:20462955
• Une isoforme alternative (isoforme 2) peut antagoniser la signalisation de l’EGF.
• Il se localise dans la membrane cellulaire, le réticulum endoplasmique, l’appareil de Golgi, le noyau et l’endosome, et il est sécrété. Il est exprimé de manière ubiquitaire ; l’isoforme 2 est présente dans les cancers de l’ovaire.
• La protéine subit d’importantes modifications post-traductionnelles (glycosylation, phosphorylation, etc.) et agit comme récepteur d’entrée du VHC.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène (aa 335-525) se situe dans le domaine extracellulaire de liaison au ligand, permettant la détection de l’EGFR à la surface cellulaire par cytométrie en flux sans perméabilisation.
• Pour la cytométrie en flux, effectuez un titrage de l’anticorps afin d’identifier la concentration de marquage optimale pour votre type cellulaire spécifique.
• Incluez un contrôle d’isotype approprié ainsi qu’une discrimination des cellules vivantes/mortes afin de garantir un signal spécifique.
• L’APC/Cyanine7 étant un colorant tandem, utilisez des contrôles de compensation appropriés dans les panels multicolores ; évitez une exposition prolongée à la lumière et les fixateurs susceptibles d’affecter la stabilité du fluorophore.
• Validez la spécificité du marquage à l’aide de lignées cellulaires négatives pour l’EGFR ou de tests de compétition avec le ligand.

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