Anticorps monoclonal de lapin anti-CD45 de souris conjugué APC/Cyanine7 pour la cytométrie en flux - P06800

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD45

• La tyrosine-protéine phosphatase C de type récepteur (CD45), codée par le gène PTPRC, est une phosphatase transmembranaire essentielle à la transduction du signal dans les cellules immunitaires. L'épissage alternatif génère de multiples isoformes (par exemple, CD45R, B220) avec des domaines extracellulaires distincts.
• Le CD45 est nécessaire à l'activation des lymphocytes T via le récepteur antigénique, agissant comme un régulateur positif après liaison à la DPP4. Il module le seuil de signalisation du récepteur des lymphocytes T.
• La région intracellulaire contient deux domaines de tyrosine-protéine phosphatase (PTP) ; le premier possède une activité catalytique, tandis que le second influence la spécificité et l'activité du substrat.
• Le CD45 déphosphoryle les kinases de la famille Src telles que LYN, FYN et LCK, régulant ainsi leurs activités kinase et les cascades de signalisation en aval dans les lymphocytes.
• L'interaction avec CLEC10A sur les cellules présentatrices d'antigènes (par exemple, les cellules dendritiques immatures) affine l'activation des lymphocytes T, contribuant au maintien de la tolérance au soi.
• Le CD45 est localisé à la membrane cellulaire et enrichi dans les radeaux membranaires et la synapse immunologique, ce qui le positionne pour l'intégration des signaux des récepteurs.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent une glycosylation étendue de type N et O, qui influence l'expression des isoformes et les interactions protéine-protéine.
• Connu sous le nom d'antigène leucocytaire commun (L-CA) et de Ly-5, le CD45 est largement exprimé sur toutes les cellules hématopoïétiques nucléées, avec des motifs spécifiques aux isoformes distinguant les sous-ensembles de leucocytes.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 26 à 566 du CD45 de souris, couvrant une grande partie du domaine extracellulaire. Cette conception permet probablement la reconnaissance de multiples isoformes du CD45, mais les utilisateurs doivent vérifier la spécificité de l'isofirme dans leur système.
• Pour la cytométrie en flux, titrez l'anticorps conjugué APC/Cyanine7 sur des leucocytes de souris pour déterminer la concentration optimale de marquage, et incluez des contrôles appropriés d'isotype et de fluorescence-moins-un (FMO).
• L'APC/Cyanine7 émet dans le canal rouge lointain (~780 nm), permettant une séparation claire des fluorophores courants comme le FITC, le PE et l'APC. Utilisez une ligne laser compatible (par exemple, excitation à 633 nm) et des jeux de filtres appropriés.
• En raison de la forte expression du CD45 sur les leucocytes, évitez le sur-marquage qui peut provoquer une liaison non spécifique ; une dilution de départ typique de 0,25 à 1,0 µg par million de cellules en cytométrie en flux est un point de référence raisonnable.
• Pour la conception de panels, considérez le CD45 comme un marqueur pan-leucocytaire pour gater les cellules immunitaires vivantes, puis combinez-le avec des anticorps spécifiques de lignée (par exemple, CD3, CD19) pour l'immunophénotypage.

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