Anticorps monoclonal APC/Cyanine7 anti-HLA-DRA pour cytométrie en flux - P01903

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du HLA-DRA

• Le gène HLA-DRA code pour la chaîne alpha de la molécule CMH de classe II HLA-DR, qui s'associe à la chaîne bêta (HLA-DRB) pour former des hétérodimères fonctionnels sur les cellules présentatrices d'antigènes. Ce complexe présente les antigènes peptidiques aux lymphocytes T CD4+, orchestrant les fonctions effectrices des lymphocytes T auxiliaires, les réponses anticorps et l'activation des macrophages (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Références associées : PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Il présente généralement des peptides extracellulaires de 10 à 30 acides aminés issus d'antigènes endocytés et traités par les lysosomes, un résidu ancre hydrophobe en position 1 étant essentiel pour la liaison (PubMed:8145819). Références associées : PMID:8145819
• Dans le microenvironnement tumoral, le HLA-DR présente des peptides issus de cellules tumorales apoptotiques ou de protéines tumorales sécrétées captées par les cellules présentatrices d'antigènes, influençant l'immunité antitumorale (PubMed:31495665). Références associées : PMID:31495665
• De plus, le HLA-DR présente des peptides de protéines intracellulaires par macroautophagie, un processus essentiel pour la sélection thymique des lymphocytes T et le maintien de la tolérance immune centrale (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Références associées : PMID:17182262 PMID:23783831
• La localisation subcellulaire s'étend à la membrane cellulaire, aux membranes endosomales/lysosomales et aux autolysosomes, ce qui reflète son rôle dynamique dans le traitement et la présentation des antigènes.
• Exprimé sur les cellules présentatrices d'antigènes professionnelles (macrophages, cellules dendritiques, lymphocytes B) et les cellules épithéliales thymiques (au niveau protéique) (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Références associées : PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• La protéine comporte une séquence signal N-terminale, une seule hélice transmembranaire et deux ponts disulfures dans le domaine extracellulaire ; elle subit une glycosylation N-liée et peut être ubiquitinylée.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps monoclonal conjugué APC/Cyanine7 est obtenu contre le HLA-DR humain recombinant ; il reconnaît probablement un épitope conformationnel. Pour la cytométrie en flux, utilisez un protocole standard de coloration de surface sur cellules vivantes, en maintenant les anticorps et les cellules au froid pour empêcher l'internalisation de l'antigène.
• Compte tenu de la réactivité croisée conservée avec le macaque cynomolgue, prévoyez des expériences de titrage pour les échantillons humains et de primates non humains afin de déterminer la concentration de travail optimale.
• Pour minimiser la liaison non spécifique dans les échantillons riches en cellules myéloïdes, incluez une étape de blocage des récepteurs Fc (par exemple, TruStain FcX humain ou produit similaire) et des contrôles d'isotype appropriés.
• La bande de 29 kDa (chaîne HLA-DRA) est souvent détectée dans le cadre de l'hétérodimère α/β du CMH II à la surface cellulaire ; dans des conditions réductrices, la chaîne alpha peut migrer à un poids moléculaire apparent légèrement supérieur en raison de la glycosylation.
• Pour la coloration intracellulaire, une fixation/perméabilisation douce est requise ; validez le protocole sur votre système d'échantillons car l'épitope peut être sensible aux traitements durs.

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