Anticorps monoclonal de lapin APC/Cyanine7 anti-CD3E pour la cytométrie en flux intracellulaire - P07766

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD3E

• Le gène humain CD3E code pour la chaîne epsilon du CD3, un composant central du complexe TCR-CD3 sur les lymphocytes T, essentiel pour les réponses immunitaires adaptatives (PubMed:15294938, PubMed:15546002, PubMed:2470098).
  Références associées : PMID:15294938, PMID:15546002, PMID:2470098
• Lors de l'engagement du TCR par les cellules présentatrices d'antigène, les motifs ITAM cytoplasmiques de CD3E sont phosphorylés par les kinases de la famille Src (LCK/FYN), créant des sites d'ancrage pour ZAP70 et initiant des cascades de signalisation en aval (PubMed:2470098, PubMed:40592325).
  Références associées : PMID:2470098, PMID:40592325
• CD3E est essentiel pour le développement correct des lymphocytes T, participant à la fois à la sélection positive et négative dans le thymus (Par similarité).
• La protéine régule également l'expression de surface du TCR-CD3 en médiant l'internalisation et la régulation à la baisse du récepteur via des motifs d'endocytose dans sa région cytosolique (PubMed:10384095, PubMed:26507128).
  Références associées : PMID:10384095, PMID:26507128
• Au-delà de la signalisation canonique du TCR, CD3E agit comme un récepteur pour ITPRIPL1, qui inhibe l'activation des lymphocytes T en recrutant NCK1 et en bloquant l'interaction avec ZAP70 et la voie ERK-NFkB (PubMed:12110186, PubMed:38614099).
  Références associées : PMID:12110186, PMID:38614099
• CD3E est une glycoprotéine transmembranaire de type I à passage unique située sur la membrane cellulaire ; elle contient un domaine extracellulaire de type immunoglobuline, une hélice transmembranaire et une queue cytoplasmique avec des ITAM.
• La protéine mature a un poids moléculaire apparent d'environ 23 kDa (masse calculée UniProt : 23 147 Da) et est sujette à la phosphorylation sur les résidus tyrosine des ITAM.

Guide expérimental et conseils techniques

• Cet anticorps est conjugué à l'APC/Cyanine7 et validé pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC intra) ; fixez et perméabilisez les cellules selon votre protocole standard avant la coloration.
• L'immunogène couvre les acides aminés 50–150 dans le domaine extracellulaire de CD3E ; vérifiez la spécificité en comparant des échantillons positifs (par exemple, PBMC humaines) et négatifs (CD3E knockout) ou en pré-incubant avec un peptide de blocage.
• Titrez l'anticorps pour déterminer la concentration de coloration optimale pour votre échantillon ; utilisez des contrôles isotypiques appropriés et une compensation de fluorescence lors de la construction de panels multicolores.
• Étant donné que l'expression de surface de CD3E est rapidement régulée à la baisse lors de l'activation des lymphocytes T, confirmez l'état d'activation cellulaire et assurez une perméabilisation adéquate pour détecter les pools intracellulaires si nécessaire.

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