Anticorps monoclonal APC lapin anti-TNF-α de souris pour FC (intra) - P06804

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du TNF-α

• Le facteur de nécrose tumorale (TNF-α) est une cytokine pro-inflammatoire principalement sécrétée par les macrophages activés, appartenant à la superfamille des ligands du facteur de nécrose tumorale (TNFSF2). Il est également connu sous le nom de cachectine et est codé par le gène Tnf (noms alternatifs Tnfa, Tnfsf2).
• Le TNF-α exerce ses effets biologiques en se liant à deux récepteurs distincts, TNFR1 (TNFRSF1A) et TNFR2 (TNFRSF1B), médiant un large éventail de réponses cellulaires, notamment l'apoptose, la survie cellulaire et l'inflammation.
• Cette cytokine est un médiateur clé de la réponse de phase aiguë et peut agir comme un pyrogène endogène, induisant la fièvre directement ou par stimulation de la sécrétion d'interleukine-1, et est impliquée dans le développement de la cachexie dans les états pathologiques chroniques.
• Dans le tissu adipeux, le TNF-α induit une résistance à l'insuline en inhibant la phosphorylation de la tyrosine IRS1 induite par l'insuline et l'absorption du glucose, et favorise la dégradation de la protéine GKAP42, contribuant à la pathogenèse du diabète de type 2. Références associées : PMID:25586176
• Le TNF-α joue un rôle significatif dans le métabolisme osseux en favorisant l'ostéoclastogenèse et en médiant ainsi la résorption osseuse, reliant l'inflammation à la perte osseuse dans des conditions telles que la polyarthrite rhumatoïde. Références associées : PMID:32741026
• Le domaine intracellulaire (ICD) du TNF-α, généré par clivage protéolytique, peut agir comme une molécule de signalisation pour induire la production d'IL-12 dans les cellules dendritiques, soulignant une fonction indépendante des récepteurs.
• Au niveau subcellulaire, le TNF-α est synthétisé sous forme de protéine transmembranaire de type II (26 kDa) sur la membrane cellulaire, et est clivé par l'enzyme de conversion du TNF-α (TACE) pour libérer la cytokine soluble de 17 kDa. La protéine subit plusieurs modifications post-traductionnelles, notamment la glycosylation, la phosphorylation, la myristoylation et la formation de ponts disulfures.
• Outre ses rôles cytotoxiques et inflammatoires, le TNF-α stimule également l'angiogenèse en synergie avec l'IL-1β et l'IL-6, et peut, dans certaines conditions, favoriser la prolifération et la différenciation cellulaire, reflétant sa nature pléiotrope.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 80-235 du TNF-α de souris (NP_038721.1), couvrant la région mature du TNF-α soluble. Cette conception cible le domaine extracellulaire, reconnaissant potentiellement à la fois les formes liées à la membrane et les formes solubles.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire, les protocoles de fixation et de perméabilisation sont essentiels. Envisagez d'utiliser un protocole de coloration intracellulaire standard avec un kit de fixation/perméabilisation adapté aux cytokines.
• Le TNF-α étant une protéine sécrétée, les cellules au repos peuvent présenter de faibles niveaux intracellulaires. Pour une détection robuste, stimulez les cellules (par exemple avec du PMA/ionomycine ou du LPS) en présence d'un inhibiteur de transport protéique (par exemple la Bréfeldine A ou la Monensine) pour accumuler le TNF-α dans l'appareil de Golgi.
• Il est recommandé de titrer l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre système expérimental spécifique, en commençant par une plage de 0,5 à 5 µg par million de cellules.
• Utilisez des contrôles appropriés, y compris des cellules non stimulées et des anticorps de contrôle d'isotype, pour différencier la coloration spécifique du bruit de fond.
• L'anticorps est conjugué à l'APC, un fluorophore brillant adapté aux panels de cytométrie en flux multicolores. Assurez-vous d'effectuer une compensation appropriée lorsqu'il est utilisé avec d'autres fluorophores.

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