Anticorps monoclonal de lapin anti-humain NT5E/CD73 conjugué à APC pour la cytométrie en flux - P21589

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NT5E/CD73

• Activité enzymatique principale : NT5E/CD73 est une 5'-nucléotidase qui hydrolyse les nucléosides monophosphates extracellulaires en nucléosides et en phosphate inorganique, avec une forte préférence pour l'AMP par rapport aux autres substrats. Cette étape est limitante dans la génération d'adénosine immunosuppressive à partir de l'ATP.
  Références associées :
  PMID:21933152 PMID:22997138 PMID:23142347 PMID:34403084
• Spécificité du substrat : Outre l'AMP, l'enzyme peut également agir sur l'IMP, l'UMP, le GMP, le CMP et plusieurs désoxynucléotides (dAMP, dCMP, dTMP), ainsi que sur le NAD et le NMN, bien que les ribonucléotides monophosphates soient les substrats préférés.
• Localisation subcellulaire : Le CD73 est attaché au feuillet externe de la membrane plasmique via une ancre glycosylphosphatidylinositol (GPI) C-terminale, positionnant son site actif dans l'espace extracellulaire pour réguler les pools de nucléotides périceilulaires.
• Modifications post-traductionnelles : La protéine est N-glycosylée et contient des ponts disulfure structurellement importants. Son attachement membranaire dépend entièrement de l'ancre GPI.
• Caractéristiques structurales : Elle appartient à la famille des 5'-nucléotidases et nécessite du zinc et d'autres ions métalliques divalents pour son activité catalytique. La molécule existe sous forme d'homodimère à la surface cellulaire.
• Pertinence pathologique : Des mutations dans NT5E sont associées à la calcification artérielle due à une déficience en CD73 (ACDC), une maladie génétique rare, et la protéine est une cible majeure de point de contrôle immunitaire en oncologie.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre l'ensemble du domaine extracellulaire (acides aminés 27–547), qui inclut les régions catalytiques et de liaison au substrat. Cette conception favorise la reconnaissance du CD73 natif et correctement replié sur les cellules vivantes.
• Pour la cytométrie en flux, envisagez de titrer l'anticorps pour déterminer la concentration de marquage optimale pour votre type cellulaire d'intérêt. Incluez des contrôles isotypiques appropriés et des colorants de viabilité.
• Le CD73 est libéré ou excrété sur des vésicules extracellulaires dans certains systèmes ; assurez-vous que la préparation des échantillons minimise les dommages cellulaires pour éviter des signaux faux négatifs.
• Ce conjugué APC est bien adapté aux panels multiplex ; vérifiez les paramètres de compensation lors de la combinaison avec d'autres fluorophores.

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