Anticorps monoclonal APC anti-TLR3 humain pour cytométrie en flux - O15455

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du TLR3

• Le récepteur de type Toll 3 (TLR3), également connu sous les noms CD283, IIAE2 et IMD83, est une protéine membranaire à simple passage de type I appartenant à la famille des récepteurs de type Toll, caractérisée par des répétitions riches en leucine (LRR) dans le domaine extracellulaire et un domaine Toll/interleukine-1 récepteur (TIR) dans la queue cytoplasmique.
• Le TLR3 est un composant clé de l'immunité innée et adaptative, agissant comme récepteur de reconnaissance de motifs moléculaires qui détecte l'ARN double brin (dsARN), une signature moléculaire des infections virales, déclenchant ainsi les réponses immunitaires antivirales.
• Après liaison au dsARN dans les endosomes, le TLR3 transmet son signal exclusivement via la protéine adaptatrice TRIF (TICAM1), qui active les facteurs de transcription NF-kappa-B et IRF3, conduisant à la production d'interférons de type I et de cytokines proinflammatoires.
• Au niveau sous-cellulaire, le TLR3 se localise principalement sur la membrane du réticulum endoplasmique, la membrane des endosomes et les endosomes précoces, ce qui lui permet de détecter le dsARN viral libéré lors de l'acidification endosomiale.
• Le TLR3 est fortement exprimé dans le placenta et le pancréas, et se trouve notamment dans les cellules dendritiques immatures CD11c+ ; il est à noter que c'est le TLR le plus fortement exprimé dans le cerveau, en particulier dans les astrocytes, la glie et les neurones.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles incluant la glycosylation, la phosphorylation et la conjugaison à l'ubiquitine, qui régulent son trafic et son activité de signalisation.
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, et des mutations du gène TLR3 sont associées à des immunodéficiences et une susceptibilité à l'encéphalite herpétique.
• Avec un poids moléculaire d'environ 104 kDa, le TLR3 contient plusieurs ponts disulfure qui stabilisent son ectodomaine LRR en forme de solénoïde, essentiel pour la reconnaissance du ligand.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à la région extracellulaire N-terminale (acides aminés 24 à 339), qui comprend plusieurs modules LRR ; assurez-vous que l'anticorps reconnaît la conformation native si vous l'utilisez pour un marquage de surface cellulaire ou endosomal dans des conditions non dénaturantes.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC), la perméabilisation est requise ; testez les protocoles de fixation et de perméabilisation (par exemple avec la saponine ou le Triton X-100) pour optimiser l'exposition de l'épitope tout en préservant la stabilité du fluorophore.
• L'expression du TLR3 est majoritairement intracellulaire dans les cellules au repos ; la stimulation par du dsARN ou une infection virale peut réguler à la hausse et redistribuer le récepteur, donc prévoyez des contrôles positifs appropriés comme les PBMC ou les cellules dendritiques traités par le poly(I:C).
• Aucune réactivité croisée avec d'autres espèces n'est rapportée ; validez la détection dans la matrice d'échantillon prévue, en particulier compte tenu de la forte expression du TLR3 dans les tissus placentaires et cérébraux.
• Le conjugué APC fournit un signal intense pour la cytométrie en flux ; utilisez des contrôles de compensation appropriés et évitez une exposition prolongée à la lumière pour prévenir le photoblanchiment.

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