Anticorps polyclonal de lapin anti-WNK3 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q9BYP7

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de WNK3

• WNK3 (Protéine kinase 3 déficiente en lysine) est une sérine/thréonine-protéine kinase codée par le gène WNK3 (également connu sous le nom de KIAA1566, PRKWNK3), appartenant à la famille des kinases WNK.
• C'est un composant clé de la cascade de kinases WNK3-SPAK/OSR1 qui régule l'homéostasie électrolytique et la récupération du volume cellulaire lors d'un stress hyperosmotique. Références associées : PMID:16275911, PMID:16275913, PMID:16501604
• Lors du rétrécissement cellulaire, WNK3 agit comme un capteur d'encombrement moléculaire et subit une séparation de phase liquide-liquide pour former des condensats sans membrane qui concentrent ses substrats. Références associées : PMID:36318922
• Au sein de ces condensats, WNK3 phosphoryle et active les kinases en aval OXSR1/OSR1 et STK39/SPAK, qui modulent à leur tour les cotransporteurs ioniques (NKCC, NCC et KCC) pour contrôler l'entrée et la sortie des ions. Références associées : PMID:22989884, PMID:16275911, PMID:16275913, PMID:16357011
• WNK3 se localise dans le cytoplasme et présente une expression tissulaire spécifique, avec des niveaux élevés dans le cerveau, les poumons, les reins, le foie et le pancréas, et des isoformes distinctes dans le cerveau (isoforme 1) et les reins (isoforme 3).
• Au-delà de son activité kinase, WNK3 agit comme une protéine d'échafaudage qui régule négativement la localisation membranaire de transporteurs tels que KCNJ1 et SLC26A9, et améliore l'influx de calcium par TRPV5/TRPV6. Références associées : PMID:16357011, PMID:17673510, PMID:18768590

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 500 à 600 de la WNK3 humaine, fournissant une région ciblée pour la génération de l'anticorps ; il est recommandé de vérifier la spécificité à l'aide de contrôles knock-out ou knock-down.
• Pour le Western blot, notez que la masse moléculaire prédite de WNK3 est d'environ 198 kDa ; optimisez les conditions de transfert pour les protéines de haut poids moléculaire (par exemple, une concentration plus faible de méthanol dans le tampon de transfert, des temps de transfert plus longs).
• Dans les expériences d'immunofluorescence/ICC, validez les protocoles de fixation et de perméabilisation, car WNK3 est une protéine cytoplasmique ; incluez des contrôles appropriés pour confirmer la localisation subcellulaire.
• Pour les applications ELISA, évaluez les performances de l'anticorps à la fois comme réactif de capture et de détection ; la réactivité croisée avec la WNK3 de souris et de rat suggère des épitopes conservés, mais vérifiez systématiquement dans le contexte de l'espèce étudiée.

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