Anticorps polyclonal anti-WNK1 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q9H4A3

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de WNK1

• WNK1 est une sérine/thréonine protéine kinase qui constitue un élément essentiel de la cascade de kinases WNK1-SPAK/OSR1, régulant la pression artérielle et l'homéostasie ionique. En cas de stress hyperosmotique, elle agit comme capteur d'encombrement moléculaire et subit une séparation de phase liquide-liquide pour créer un compartiment sans membrane qui concentre WNK1 avec ses substrats OXSR1/OSR1 et STK39/SPAK, favorisant leur phosphorylation et leur activation. Références associées : PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913, PMID:36318922
• Les OXSR1/OSR1 et STK39/SPAK activés phosphorylent et activent les co-transporteurs Na-K-Cl (SLC12A1/NKCC2, SLC12A2/NKCC1) tout en inhibant les co-transporteurs K-Cl (SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), favorisant ainsi l'influx ionique et l'augmentation du volume régulateur. Références associées : PMID:16263722, PMID:21321328, PMID:19665974
• Au-delà du transport ionique, WNK1 régule l'angiogenèse dans les cellules endothéliales par activation de la voie SPAK/OSR1, contribuant à la chimiotaxie et à la prolifération. Références associées : PMID:25362046
• WNK1 phosphoryle des substrats dont PCF11 (qui régule l'export nucléaire de l'ARNm) et NEDD4L, et agit comme régulateur négatif de l'autophagie. Elle exerce également des fonctions d'échafaudage indépendantes de son activité kinase, comme la stabilisation du complexe protéique de la membrane du réticulum endoplasmique et la régulation d'ENaC par activation de SGK1. Références associées : PMID:29196535, PMID:27911840, PMID:33964204, PMID:36373794
• WNK1 est nécessaire pour l'abscission mitotique et peut participer à la réorganisation du cytosquelette d'actine. Références associées : PMID:21220314, PMID:10660600
• Elle est largement exprimée avec des niveaux maximum dans les testicules, le cœur, les reins et le muscle squelettique ; un isoforme spécifique du rein défectueux pour l'activité kinase agit comme régulateur dominant négatif de la kinase pleine longueur. Au niveau sous-cellulaire, WNK1 se localise dans le cytoplasme, le noyau et le fuseau mitotique.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène comprend les acides aminés N-terminaux 1-210 de la WNK1 humaine ; cette région ne chevauche pas le domaine kinase (résidus 221–491), ce qui permet la détection à la fois de la forme pleine longueur et des isoformes potentiellement défectueuses pour l'activité kinase.
• Pour le Western blot, notez le poids moléculaire prédit élevé (~251 kDa) ; utilisez un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple 6 %) et un transfert humide avec une durée prolongée pour garantir un transfert efficace.
• En immunofluorescence/immunocytochimie, WNK1 se localise dans le cytoplasme, le noyau et le fuseau mitotique ; une fixation et une perméabilisation adaptées doivent être validées pour le type cellulaire et le compartiment d'intérêt spécifique.
• En tant qu'anticorps polyclonal, une variabilité entre lots peut se produire ; incluez des contrôles positifs (par exemple HeLa, HEK293) et négatifs dans chaque expérience pour confirmer la réactivité.
• Pour l'ELISA, envisagez un format sandwich avec un anticorps de capture validé si une détection quantitative est nécessaire.

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