Anticorps polyclonal de lapin anti-WIPI1 pour WB, ELISA - Q5MNZ9

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de WIPI1

• Identité et famille de la protéine : WIPI1 (protéine 1 interagissant avec les phosphoinositides à domaine répété WD), également appelée homologue de la protéine Atg18 ou WIPI de 49 kDa, appartient à la famille WIPI des protéines à répétitions WD40 qui interagissent avec les phosphoinositides. Ces répétitions sont essentielles à sa liaison lipidique et à ses fonctions autophagiques.
• Fonction principale dans l'autophagie : WIPI1 est un composant clé de la machinerie de l'autophagie, responsable de la formation des autophagosomes qui acheminent le contenu cytoplasmique vers les lysosomes pour dégradation. Elle se lie au phosphatidylinositol 3-phosphate (PtdIns3P) et est recrutée sur le réticulum endoplasmique pour initier l'assemblage du phagophore (PubMed:15602573, PubMed:20114074, PubMed:20484055). Références associées :
  • PMID:15602573
  • PMID:20114074
  • PMID:20484055
• Positionnement dans la voie de signalisation : Agissant en aval de ULK1 et des PI3-kinases, WIPI1 détecte le PtdIns3P généré sur les membranes du réticulum endoplasmique. Elle aide ensuite WIPI2 à recruter le complexe ATG12-ATG5-ATG16L1, qui induit directement l'élongation de la membrane autophagosome naissante. Cette fonction est essentielle pour l'autophagie induite à la fois par la famine et par le calcium, ainsi que pour la mitophagie (PubMed:28561066). Références associées :
  • PMID:28561066
• Transfert lipidique et formation de complexes : Avec WDR45/WIPI4, WIPI1 améliore l'association des protéines ATG2 (ATG2A ou ATG2B) avec les membranes riches en PI3P, favorisant ainsi le transfert lipidique pour l'expansion de l'autophagosome (PubMed:31271352). Références associées :
  • PMID:31271352
• Xénophagie et défense antimicrobienne : WIPI1 participe à l'autophagie sélective des pathogènes, comme Staphylococcus aureus, en englobant les bactéries dans des vésicules de type autophagosome positives pour WIPI1, destinées à la dégradation lysosomale (PubMed:22829830). Références associées :
  • PMID:22829830
• Rôles non autophagiques : Au-delà de l'autophagie canonique, WIPI1 régule la maturation des mélanosomes et la transcription des enzymes mélanogènes, un processus indépendant des voies induites par la famine (PubMed:21317285). Elle pourrait également être impliquée dans le trafic du récepteur du mannose-6-phosphate (PubMed:15020712). Références associées :
  • PMID:21317285
  • PMID:15020712
• Distribution tissulaire et localisation sous-cellulaire : WIPI1 est exprimée de manière ubiquitaire, avec des niveaux les plus élevés dans le muscle squelettique, le cœur, les testicules, le pancréas et le placenta, et elle est surexprimée dans de nombreuses lignées cellulaires tumorales. Elle se localise sur le réseau trans-Golgi, les endosomes, les vésicules recouvertes de clathrine et les structures préautophagiques, et s'associe également au cytosquelette.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Conception de l'immunogène : L'immunogène couvre les acides aminés 187-446 de la WIPI1 humaine, une région contenant plusieurs répétitions WD40. Cette portion centrale est conservée chez les espèces, ce qui explique la réactivité croisée observée avec la souris et le rat.
• Western blotting (WB) : Compte tenu de la forte expression de WIPI1 dans le muscle, le cœur et les testicules, les lysats tissulaires de ces sources constituent des contrôles positifs adaptés. Le poids moléculaire prédit est d'environ 49 kDa, mais des bandes supplémentaires peuvent apparaître dues à l'épissage alternatif ou aux modifications post-traductionnelles. Il est conseillé d'inclure une étape de blocage et de valider la spécificité à l'aide de contrôles siARN ou knock-out.
• Application ELISA : Cet anticorps peut être utilisé dans des formats ELISA indirects. Pour le développement d'un ELISA sandwich, envisagez de l'associer à un anticorps de capture monoclonal spécifique d'un épitope non chevauchant. Validez-le avec une protéine WIPI1 recombinante (comme l'immunogène) ou des lysats cellulaires de cellules fortement exprimant la protéine.
• Réactivité croisée et cohérence inter-espèces : La réactivité croisée rapportée avec l'homme, la souris et le rat implique que les épitopes reconnus sont conservés. Néanmoins, un Western blot pilote avec des lysats des trois espèces est recommandé pour confirmer la réactivité et le profil des bandes.

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