Anticorps monoclonal anti-Vinculine pour WB, IF-P, ELISA - P18206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la Vinculine

• La Vinculine est une protéine de liaison à l'actine hautement conservée qui relie les intégrines et les cadhérines au cytosquelette d'actine, jouant des rôles clés dans l'adhésion cellule-matrice et cellule-cellule.
• Un isoforme spécifique du muscle, appelé métavinculine (MV), résulte d'un épissage alternatif et contient un exon supplémentaire ; il est principalement exprimé dans le muscle cardiaque et squelettique.
• La Vinculine se localise aux adhésions focales cellule-matrice, aux jonctions adhérentes cellule-cellule, à la région périnucléaire, ainsi qu'à des structures spécialisées telles que les podosomes et le sarcolemme.
• La protéine subit de multiples modifications post-traductionnelles, notamment phosphorylation, acétylation et palmitoylation, qui régulent son activation, ses interactions protéiques et son adressage à la membrane.
• La Vinculine agit comme un mécanocapteur ; des changements conformationnels induits par la tension exposent des sites de liaison cryptiques pour la taline et la F-actine, renforçant ainsi les complexes d'adhésion.
• En tant que composant clé du complexe cadhérine-caténine, la Vinculine module l'expression de surface de l'E-cadhérine et potentialise la mécanodétection au niveau des jonctions adhérentes, impactant la morphogenèse et l'homéostasie tissulaires.
• Conformément à ses rôles essentiels dans l'adhésion et la mécanotransduction, des mutations du gène VCL sont associées à la cardiomyopathie dilatée (CMD1W) et à la cardiomyopathie hypertrophique (CMH15).
• De plus, la Vinculine participe à la morphologie, à la migration et à l'invasion cellulaires, comme en témoignent son recrutement vers les podosomes et son influence sur la dynamique des lamellipodes.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique correspondant à la région C-terminale (aa800-900) de la Vinculine humaine ; cette région est conservée entre l'humain, la souris et le rat, ce qui explique la réactivité croisée rapportée.
• Pour le Western blot, la Vinculine migre à un poids moléculaire apparent d'environ 124 kDa ; utilisez des pourcentages de gel appropriés (par exemple, SDS-PAGE 8%) et vérifiez l'efficacité du transfert par coloration des protéines totales.
• En immunofluorescence (IF-P), considérez des conditions de fixation et de perméabilisation qui préservent l'architecture des adhésions focales et des jonctions adhérentes (par exemple, PFA 4% suivi de Triton X-100 0,1%). Une co-marquage avec des marqueurs de la paxilline ou de la F-actine peut confirmer la localisation.
• Lors de la réalisation d'ELISA, titrez l'anticorps contre le peptide immunogène et la protéine native pour déterminer les concentrations optimales ; une adsorption croisée peut être évaluée si un bruit de fond élevé est observé dans des matrices complexes.
• La Vinculine étant une protéine ubiquitaire, l'inclusion de contrôles de charge appropriés (par exemple, GAPDH, β-actine) est essentielle pour les analyses quantitatives.
• Pour les études impliquant des tissus musculaires, notez que l'anticorps peut reconnaître à la fois les isoformes de la Vinculine et de la métavinculine ; cette dernière migre légèrement plus haut, à environ 150 kDa.

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