Anticorps monoclonal de lapin anti-Ubiquitine pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P0CG47

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Ubiquitine (Polyubiquitine-B)

• L'Ubiquitine, codée par le gène UBB, est une protéine hautement conservée de 76 acides aminés qui existe soit libre (non ancrée), soit attachée de manière covalente aux protéines cibles via une liaison isopeptidique. Elle peut former des chaînes de polyubiquitine liées par différentes résidus lysine ou des chaînes linéaires via la méthionine initiatrice.
• Les chaînes de polyubiquitine remplissent diverses fonctions : les chaînes liées par Lys48 ciblent les protéines pour la dégradation par le protéasome ; les chaînes liées par Lys63 sont impliquées dans l'endocytose, la réparation de l'ADN et la signalisation NF-kappa-B ; d'autres liaisons (Lys6, Lys11, Lys29, Lys33) régulent des processus tels que la réparation de l'ADN, l'ERAD, le cycle cellulaire, la réponse au stress protéotoxique et la modification des kinases.
• La protéine se localise dans le cytoplasme, le noyau et la membrane externe des mitochondries, reflétant ses rôles étendus dans l'homéostasie cellulaire et la signalisation.
• L'Ubiquitine est soumise à diverses modifications post-traductionnelles, y compris la phosphorylation et l'ADP-ribosylation, et elle forme fréquemment des liaisons isopeptidiques lors de la conjugaison.
• En tant que membre de la famille des protéines ubiquitine, UBB représente un précurseur de polyubiquitine qui est clivé en monomères d'ubiquitine matures, assurant un approvisionnement constant pour les besoins cellulaires.
• La conjugaison de l'ubiquitine cible généralement les résidus lysine sur les substrats, bien qu'une conjugaison rare à des résidus cystéine ou sérine ait été observée, élargissant ainsi la portée de la signalisation par l'ubiquitine.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène comprend les acides aminés 1-100 de l'Ubiquitine humaine, ce qui couvre la protéine mature pleine longueur, donc l'anticorps peut reconnaître l'ubiquitine totale. Pensez à utiliser des témoins appropriés pour distinguer l'ubiquitine non ancrée des formes conjuguées dans vos tests.
• Pour le transfert Western (WB), une bande autour de 26 kDa peut correspondre au précurseur de la polyubiquitine-B, mais les monomères d'ubiquitine individuels (~8,5 kDa) conjugués aux cibles apparaîtront comme des traînées de poids moléculaire plus élevé. Optimisez la préparation des échantillons et les conditions de détection pour résoudre les espèces polyubiquitinylées.
• En IHC-P et IF/ICC, vérifiez la spécificité en comparant les profils de marquage dans des tissus/lignées cellulaires positifs et négatifs connus, et incluez un test de compétition avec un peptide bloquant si disponible.
• Pour les applications ELISA, assurez-vous que l'immunogène recombinant ou l'ubiquitine purifiée est utilisé comme standard pour valider la sensibilité et la linéarité dans votre système de test.

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