Anticorps polyclonal de lapin anti-UBE2C pour WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - O00762

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'UBE2C

• L'UBE2C (UBCH10) est un membre de la famille des enzymes de conjugaison de l'ubiquitine (E2), chargé d'accepter l'ubiquitine de l'enzyme E1 et de catalyser son transfert vers les substrats.
• Cette protéine est un cofacteur essentiel du complexe promoteur de l'anaphase/cyclosome (APC/C), une ligase E3 de l'ubiquitine critique qui régule la progression mitotique en ciblant des substrats clés pour la dégradation par le protéasome.
• L'UBE2C catalyse principalement les chaînes de polyubiquitine liées par le résidu Lys-11, une liaison non canonique qui est cruciale pour la reconnaissance des substrats par l'APC/C et leur dégradation ultérieure.
• En plus des chaînes liées par le Lys-11, l'UBE2C peut également médier la polyubiquitination liée par le Lys-48 in vitro, ce qui souligne sa polyvalence dans la formation de chaînes d'ubiquitine.
• L'épissage alternatif du gène UBE2C peut générer plusieurs variants de transcrits, produisant potentiellement des isoformes aux propriétés de régulation distinctes.
• Des modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation et l'acétylation, sont indiquées dans les mots-clés UniProt, suggérant une régulation dynamique de l'activité de l'UBE2C au cours du cycle cellulaire.
• La protéine est très conservée entre les espèces, ce qui permet une réactivité croisée avec les orthologues de souris et de rat, comme l'a confirmé la validation de l'anticorps.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène de longueur complète (aa 1-179) peut permettre la reconnaissance de toutes les isoformes d'UBE2C ; par conséquent, des bandes de masses moléculaires légèrement différentes peuvent être observées dans certains tissus ou états cellulaires.
• Pour le Western blotting, utilisez des lysats de cellules arrêtées en mitose (par exemple, traitement par nocodazole) comme contrôle positif, car les niveaux d'UBE2C culminent pendant la mitose. Une bande proche de 20 kDa est attendue.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), prévoyez une récupération d'antigène induite par la chaleur avec un tampon citrate (pH 6,0) et validez sur des tissus positifs connus, comme les tumeurs hautement prolifératives ou le testicule.
• En immunoprécipitation (IP), l'anticorps polyclonal peut enrichir l'UBE2C et ses partenaires d'interaction ; un prétraitement de clairance avec un IgG contrôle est recommandé pour réduire la liaison non spécifique.
• Pour l'ELISA, optimisez la concentration d'antigène de revêtement et la dilution de l'anticorps en utilisant la protéine UBE2C recombinante comme standard ; notez que les anticorps polyclonaux peuvent présenter une légère variabilité d'un lot à l'autre.
• Incluez systématiquement des contrôles pertinents (par exemple, des lysats de knockout UBE2C) pour confirmer la spécificité, notamment lorsque vous travaillez avec des échantillons où l'expression d'UBE2C est faible ou régulée.

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