Anti-UBA1/7 Lapin PolymAb® pour WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P22314 / P41226

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'UBA1/7

• L'UBA1 (enzyme d'activation du modificateur semblable à l'ubiquitine 1) est l'enzyme E1 principale qui initie la conjugaison de l'ubiquitine, ciblant les protéines pour la dégradation par le protéasome (PubMed:1447181, PubMed:1606621, PubMed:33108101). Références associées : PMID:1447181 PMID:1606621 PMID:33108101
• Il active l'ubiquitine par adénylation dépendante de l'ATP de sa glycine C-terminale, formant un intermédiaire thioester ubiquitine-E1 essentiel pour le transfert E2/E3 ultérieur (PubMed:1447181). Références associées : PMID:1447181
• L'UBA1 joue un rôle critique dans la réponse aux dommages à l'ADN en facilitant la formation de foyers induits par rayonnement et en recrutant des protéines de réparation telles que TP53BP1 et BRCA1 sur les sites de dommages (PubMed:22456334). Références associées : PMID:22456334
• La protéine se localise dans plusieurs compartiments sous-cellulaires, y compris le cytoplasme, le noyau et les mitochondries, ce qui est cohérent avec ses rôles fonctionnels divers.
• L'UBA1 est exprimé de manière ubiquitaire dans les tissus, avec une détection confirmée dans les érythrocytes au niveau protéique.
• Les modifications post-traductionnelles de l'UBA1 comprennent l'acétylation et la phosphorylation, et les mutations du gène sont associées à des troubles neurodégénératifs et au syndrome VEXAS.
• La protéine UBA7 (enzyme d'activation du modificateur semblable à l'ubiquitine 7) est une enzyme E1 apparentée avec une spécificité distincte pour ISG15, mais partage une homologie structurelle avec l'UBA1, permettant une reconnaissance croisée par cet anticorps.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Le peptide immunogène (aa959-1058 de l'UBA1) se trouve dans une région qui partage une homologie significative avec l'UBA7, ce qui explique la spécificité double. Validez la spécificité en utilisant des contrôles par knockdown ou knockout dans vos échantillons.
• En Western blotting (WB), attendez-vous à des bandes prédominantes à environ 118 kDa pour l'UBA1 et environ 112 kDa pour l'UBA7, avec des variations possibles en fonction des modifications post-traductionnelles ou des isoformes d'épissage.
• Pour l'immunofluorescence (IF) et l'immunohistochimie (IHC), notez que l'UBA1 est distribué dans le cytoplasme, le noyau et les mitochondries ; optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation pour préserver le signal dans ces compartiments.
• Pour les applications ELISA, envisagez d'utiliser la protéine recombinante UBA1 ou des lysats cellulaires dopés avec la cible comme standards, et effectuez des tests de réactivité croisée contre l'UBA7 pour confirmer la détection.
• En tant qu'anticorps monoclonal recombinant de lapin (Lapin PolymAb®), ce réactif offre une grande cohérence d'un lot à l'autre ; cependant, les dilutions de travail optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque essai et type d'échantillon.

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