Anticorps polyclonal de lapin anti-Type S APL (PML/RARA) pour WB, ELISA - P29590/P10276

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la PML

• La PML agit comme protéine d’échafaudage des corps nucléaires PML (PML-NB), impliqués dans la suppression tumorale, la régulation transcriptionnelle, l’apoptose, la sénescence, la réponse aux dommages de l’ADN et la défense antivirale. Elle inhibe l’export nucléaire des ARNm médié par EIF4E en réduisant l’affinité d’EIF4E pour la coiffe 5' m7G des ARNm cibles. Références associées : PMID:11500381 PMID:11575918 PMID:18391071
• L’isoforme PML-4 régule de manière essentielle l’apoptose et la suppression de la croissance : elle active RB1, inhibe AKT1 par l’intermédiaire de phosphatases, module négativement la voie PI3K (en inhibant MTOR et en activant PTEN) et régule positivement p53 en favorisant son acétylation/phosphorylation et en bloquant sa dégradation médiée par MDM2.
• PML-4 agit comme répresseur transcriptionnel de TBX2 au cours de la sénescence cellulaire, nécessite un complexe RBL2/E2F4 fonctionnel, régule la réparation des cassures double brin de l’ADN par interaction avec WRN, contrôle négativement la télomérase en se liant à TERT et module la localisation nucléaire de PER2 ainsi que le rythme circadien.
• Les isoformes nucléaires (PML-1 à PML-5) coopèrent avec SATB1 dans le remodelage local des boucles de chromatine et la régulation de l’expression génique au locus MHC-I ; PML-2 est nécessaire à une transcription efficace des gènes MHC II induite par l’IFN-gamma via la régulation de CIITA.
• La PML présente une large activité antivirale contre les virus à ADN et à ARN grâce à divers mécanismes spécifiques aux isoformes, notamment la séquestration des capsides virales, l’inhibition de la synthèse des ARNm et des protéines virales, ainsi que la restriction des polymérases virales dépendante de SUMO.
• Elle fonctionne comme une ligase E3 des protéines SUMO, les isoformes PML-3 et PML-6 présentant l’activité de SUMOylation la plus élevée ; elle sumoyle des cibles virales et cellulaires, telles que la protéine virale immédiate précoce IE1 du HHV-5. Références associées : PMID:20972456 PMID:28250117
• Sur le plan subcellulaire, la PML se localise dans le noyau (nucléoplasme, corps PML, nucléole), le cytoplasme, la membrane du réticulum endoplasmique et la membrane des endosomes précoces ; les PML-NB sont désorganisés dans la leucémie aiguë promyélocytaire par l’oncoprotéine PML-RARA.
• La PML appartient à la famille des protéines TRIM (TRIM19) et contient des domaines en doigt de zinc RING, B-box et en hélice-coiled-coil ; l’épissage alternatif produit plusieurs isoformes présentant des fonctions biologiques et des distributions subcellulaires distinctes.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Le mélange d’immunogènes composé de peptides C-terminaux de PML et N-terminaux de RARA est conçu pour cibler la jonction de fusion PML/RARA ; il faut tenir compte d’une possible réactivité avec la PML ou la RARA de type sauvage, qui doit être validée à l’aide de modèles cellulaires positifs et négatifs pour la fusion.
• Pour le Western blot, plusieurs bandes peuvent apparaître en raison des isoformes de PML (~47–50 kDa) et des variants de RARA (~62–97 kDa) ; la protéine de fusion PML-RARA peut migrer différemment. Il convient donc d’utiliser des contrôles positifs appropriés pour l’APL (par exemple, la lignée cellulaire NB4).
• L’ELISA peut être utilisé pour le criblage ou le titrage ; une protéine PML-RARA recombinante ou des lysats cellulaires provenant d’échantillons de patients atteints d’APL peuvent servir de contrôles positifs.
• En tant qu’anticorps polyclonal, il peut offrir une détection robuste, mais nécessite une optimisation rigoureuse du blocage et de la dilution de l’anticorps afin de réduire le bruit de fond non spécifique.
• Le produit est expédié dans un sac de glace ; à réception, le conserver à la température recommandée afin de maintenir sa stabilité à long terme.

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