Anticorps monoclonal de lapin Anti-TriMéthyl-Histone H3-K9 (Q16695/P68431) pour l'épigénétique

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

• Fonction : L'histone H3 est un composant central du nucléosome, qui enroule et compacte l'ADN en chromatine pour réguler la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication et la stabilité chromosomique. Les modifications post-traductionnelles des histones, connues sous le nom de code histone, modulent la structure de la chromatine et l'expression génique.
• Localisation subcellulaire : Localisée principalement dans le noyau et associée aux chromosomes tout au long du cycle cellulaire.
• Spécificité tissulaire : Le variant d'histone H3 H3.1t (Q16695) est exprimé spécifiquement dans les cellules testiculaires, tandis que le variant canonique H3.1 (P68431) est exprimé de manière ubiquitaire dans tous les tissus.
• Modifications post-traductionnelles : L'histone H3 est soumise à une vaste gamme de modifications covalentes, la lysine 9 étant un site de régulation clé. La lysine 9 peut subir la citrullination (conversion de l'arginine en citrulline) PMID:15345777 PMID:16567635 et la diméthylation symétrique de l'arginine. De plus, la triméthylation de la lysine 9 (H3K9me3) est une marque de chromatine répressive bien caractérisée. Cet anticorps détecte spécifiquement l'histone H3 triméthylée au niveau de la lysine 9. Références associées : PMID:15345777, PMID:16567635

Conseils expérimentaux et techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été obtenu contre un peptide synthétique triméthylé incluant la lysine 9 de l'histone H3 humaine. Lors de l'utilisation de cet anticorps, pensez à valider sa spécificité en le testant sur un peptide H3 non modifié ou des peptides portant d'autres modifications (par exemple monométhyle, diméthyle, acétyle) pour confirmer sa sélectivité pour l'état triméthylé.
• Western Blot (WB) et Dot Blot (DB) : Pour le WB, utilisez des protocoles standard d'extraction d'histones (extraction acide ou sel élevé) pour enrichir les protéines basiques. Assurez un blocage adéquat et une dilution correcte de l'anticorps pour minimiser la liaison non spécifique. Pour le DB, vérifiez si nécessaire la réactivité croisée avec d'autres modifications d'histones.
• Immunofluorescence/Immunocytochimie (IF/ICC) : Optimisez les conditions de perméabilisation et de fixation pour préserver la morphologie nucléaire et l'accessibilité de l'antigène. Un co-marquage avec du DAPI peut aider à confirmer la localisation nucléaire.
• ELISA : Utilisable pour le criblage à haut débit ; pensez à revêtir les plaques avec des peptides synthétiques méthylés et non méthylés pour évaluer la spécificité.
• Immunoprécipitation de la chromatine (ChIP, ChIP-seq) et CUT&Tag : Cet anticorps est adapté à l'enrichissement par ChIP de la chromatine marquée par H3K9me3. Vous pouvez utiliser la ChIP par réticulation (X-ChIP) ou la ChIP native (N-ChIP) ; validez avec des loci génomiques de contrôle positif et négatif (par exemple hétérochromatine vs promoteurs actifs). Pour le CUT&Tag, suivez les protocoles publiés pour les applications à faible entrée ou unicellulaires. Validez l'anticorps dans votre système d'échantillon avant de réaliser des expériences à grande échelle.

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