Anticorps polyclonal de lapin anti-TNF-α pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01375

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du TNF-α

• Le TNF-α est une cytokine homotrimérique qui existe sous la forme d'un précurseur transmembranaire de type II de 26 kDa et d'une forme soluble de 17 kDa générée par clivage protéolytique. Sa structure comprend un domaine intracellulaire, une hélice transmembranaire unique et un domaine extracellulaire de liaison au récepteur en C-terminal.
• Codé par le gène TNF (alias TNFA, TNFSF2) sur le chromosome 6 humain, le TNF-α est un membre prototype de la superfamille du facteur de nécrose tumorale, qui comprend 19 ligands régulant divers processus biologiques.
• Le TNF-α signale principalement par l'intermédiaire de deux récepteurs, TNFRSF1A/TNFR1 et TNFRSF1B/TNFBR. Il est principalement sécrété par les macrophages activés et exerce des effets pléiotropes, notamment l'induction de l'apoptose dans certaines lignées de cellules tumorales, de la fièvre (pyrogénicité) et de la cachexie.
• Dans la polyarthrite rhumatoïde, le TNF-α altère la fonction des lymphocytes T régulateurs en régulant à la hausse la protéine phosphatase 1 (PP1), qui déphosphoryle le résidu clé Ser-418 de FOXP3, provoquant un dysfonctionnement des Treg. Références connexes : PMID:23396208
• Le TNF-α agit comme un médiateur clé de la mort cellulaire dans l'action anticancéreuse des neutrophiles stimulés par le BCG combinés à un mimétique DIABLO/SMAC, comme démontré dans la lignée cellulaire de cancer de la vessie RT4v6. Références connexes : PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Synergiquement avec l'IL-1B et l'IL-6, le TNF-α induit la production de VEGF, favorisant ainsi l'angiogenèse. Références connexes : PMID:12794819
• La localisation subcellulaire est dynamique : la protéine de pleine longueur réside à la membrane cellulaire, tandis que le domaine ectoplasmique clivé est sécrété. Le domaine intracellulaire (ICD) peut transloquer dans le noyau et stimuler la production d'IL-12 dans les cellules dendritiques.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation, la myristoylation, la phosphorylation et la formation de ponts disulfures, toutes essentielles pour un repliement, une activité et une stabilité corrects.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène correspond à la région C-terminale (aa 134-233) du TNF-α humain, qui se situe dans la partie mature sécrétée. L'anticorps polyclonal résultant peut reconnaître les formes membranaires et solubles de la cytokine.
• Pour le western blot, une bande à environ 26 kDa représente le précurseur transmembranaire de pleine longueur, tandis qu'une bande à ~17 kDa indique la forme soluble libérée. Utilisez des lysats de macrophages ou de monocytes stimulés par le LPS comme témoins positifs.
• En immunohistochimie, les sections incluses en paraffine peuvent nécessiter une récupération d'antigène par chaleur. Envisagez de tester des tissus connus pour être riches en TNF-α, tels que les ganglions lymphatiques enflammés ou la synovie rhumatoïde.
• Lors de l'application de l'immunofluorescence ou de l'ELISA, validez la spécificité de l'anticorps en utilisant du TNF-α recombinant ou des lignées cellulaires positives/négatives pertinentes exprimant la cible.

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