PolymAb® de lapin anti-STIM1 pour WB, IHC-P, IP, ELISA - Q13586

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de STIM1

• STIM1 agit comme un capteur de Ca²⁺ qui contrôle deux principaux canaux calciques entrants rectifiants à la membrane plasmique : les canaux calciques activés par libération de calcium (CRAC) et les canaux sélectifs calciques régulés par l'arachidonate (ARC), jouant un rôle central dans l'homéostasie calcique. Références associées : PMID:15866891 PMID:16005298 PMID:16208375

• Lors de la déplétion des stocks calciques du réticulum endoplasmique (RE), STIM1 s'oligomérise et se transloque de la membrane du RE vers les jonctions RE-membrane plasmique, où il active directement les sous-unités des canaux CRAC ORAI1, ORAI2 et ORAI3 pour générer une entrée calcique soutenue et oscillatoire. Références associées : PMID:16537481 PMID:32415068

• STIM1 est impliqué dans la formation de l'émail, mettant en évidence son rôle dans les processus de calcification tissulaire spécifiques. Références associées : PMID:24621671

• La protéine régule négativement la réponse interféron de type I en retenant l'adaptateur de signalisation STING au niveau du réticulum endoplasmique, empêchant ainsi son activation et la signalisation immunitaire en aval. Références associées : PMID:30643259

• STIM1 est exprimé de manière ubiquitaire dans diverses cellules primaires humaines et lignées cellulaires tumorales, ce qui souligne son rôle fondamental dans la physiologie cellulaire.

• Au niveau sous-cellulaire, STIM1 est localisé dans la membrane cellulaire, la membrane du réticulum endoplasmique, le cytoplasme, le cytosquelette et le réticulum sarcoplasmique, ce qui est cohérent avec sa fonction de navette dynamique.

• Les modifications post-traductionnelles comprennent la N-glycosylation et la phosphorylation, qui peuvent réguler sa stabilité et son activité. La protéine contient un peptide signal, une seule hélice transmembranaire et un domaine cytoplasmique en bobine superenroulée.

• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, qui peuvent présenter une expression tissulaire spécifique ou des propriétés fonctionnelles distinctes.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 530 à 685, une région du segment C-terminal cytoplasmique de STIM1. Cette conception peut favoriser la détection de la protéine pleine longueur et de certains variants d'épissage, mais peut ne pas détecter les isoformes dépourvus de cette région. Validez l'anticorps dans votre lignée cellulaire ou tissu cible.

• Pour le Western Blot, une bande prédominante proche de 77 kDa est attendue, bien que des bandes supplémentaires puissent apparaître du fait de la glycosylation ou de l'épissage alternatif. Utilisez des contrôles de charge appropriés et confirmez la spécificité avec des contrôles négatifs (par exemple, extinction par ARNsi ou knock-out CRISPR si disponible).

• En immunohistochimie (IHC-P), la méthode de récupération antigénique et la dilution de l'anticorps doivent être optimisées, car la localisation intracellulaire de STIM1 peut nécessiter une perméabilisation. Incluez des contrôles d'isotype appropriés et validez la coloration avec des tissus positifs et négatifs connus.

• Pour l'immunoprécipitation (IP), pré-incubez l'anticorps avec des billes de protéine A/G pour une capture efficace, et envisagez une réticulation pour éviter l'interférence des chaînes lourdes/légères lors du Western Blot en aval. Confirmez la co-précipitation des partenaires d'interaction connus comme ORAI1.

• Pour l'ELISA, titrez l'anticorps contre l'immunogène ou le lysat cellulaire pour déterminer les conditions optimales de revêtement et de détection. Associez-le à un anticorps de détection apparié ou à un secondaire conjugué pour les configurations d'ELISA sandwich.

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