Anticorps polyclonal anti-Smad4 pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13485

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Smad4

• SMAD4 est le médiateur commun (co-SMAD) de la transduction du signal de la superfamille TGF-β. Il forme un complexe hétérotrimérique avec les SMAD régulés par les récepteurs (par ex. SMAD2/3) dans le noyau, ce qui est essentiel pour la régulation transcriptionnelle médiée par le TGF-β.
  Références associées :
  PMID:25514493
• Agit en tant que coactivateur transcriptionnel : SMAD4 facilite la liaison à l'ADN du complexe SMAD2/SMAD4/FAST-1 et fournit un domaine d'activation pour la transcription dirigée par SMAD1 ou SMAD2. Il participe également au complexe du facteur de transcription AP-1 (SMAD3/SMAD4/JUN/FOS) pour potentialiser les réponses au TGF-β.
• Fonctionne comme un suppresseur de tumeur ; la perte ou l'inactivation de SMAD4 est un événement fréquent dans l'adénocarcinome canalaire du pancréas, le cancer colorectal et d'autres pathologies malignes, ce qui souligne son rôle dans le contrôle de la croissance.
• En physiologie musculaire, SMAD4 agit comme un interrupteur nodal : lorsqu'il est recruté par la myostatine (MSTN), il favorise l'atrophie via la signalisation SMAD2/4 ; lorsqu'il est libéré, il se dirige vers l'hypertrophie médiée par BMP via SMAD1/5/8 (par similarité).
• SMAD4 régule positivement l'activité kinase de PDPK1 en favorisant sa dissociation de la protéine inhibitrice 14-3-3 YWHAQ.
• Il est localisé à la fois dans le cytoplasme et le noyau ; la translocation nucléaire est induite après stimulation par le TGF-β ou le BMP, où il s'accumule dans des complexes transcriptionnellement actifs.
• Il contient un domaine MH1 N-terminal pour la liaison à l'ADN sur les SBE (5'-GTCT/AGAC-3') et un domaine MH2 C-terminal pour l'interaction avec le récepteur, l'oligomérisation et l'activation transcriptionnelle. La protéine est soumise à des modifications : acétylation, phosphorylation et ubiquitination.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène correspond au domaine MH2 C-terminal (acides aminés 320–552), qui est hautement conservé chez l'homme, la souris et le rat, ce qui est cohérent avec la réactivité croisée rapportée. Pour de nouvelles espèces, un alignement de séquence est recommandé.
• Pour le Western blot (WB), une bande d'environ 60 kDa est attendue. Utilisez des contrôles de charge appropriés et validez la spécificité dans des lysates traités par TGF-β comparativement à des lysates non traités.
• Pour l'immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC) et l'immunohistochimie (IHC-P), un marquage nucléaire ou cytoplasmique peut être observé selon le contexte de signalisation. Incluez des témoins négatifs appropriés (par ex. lignées cellulaires knock-out ou peptide de blocage) pour vérifier la spécificité du signal.
• Pour les applications ELISA, optimisez l'antigène de revêtement et les conditions de détection. L'anticorps peut être associé à des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes différents pour développer des systèmes ELISA sandwich pour la quantification de SMAD4.
• Compte tenu de la nature polyclonale de l'anticorps, la cohérence entre lots doit être vérifiée dans les essais quantitatifs critiques. Envisagez d'utiliser la technologie d'anticorps recombinants si la reproductibilité est une préoccupation majeure.

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