Anticorps polyclonal de lapin anti-SIGLEC3/CD33 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P20138

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de SIGLEC3/CD33

• CD33 (Siglec-3, p67, gp67) est une protéine membranaire de type I à passage unique et un membre de la famille des lectines de type immunoglobuline se liant à l'acide sialique (Siglec), caractérisée par un domaine Ig-like de type V en position N-terminale et une queue cytoplasmique contenant deux motifs inhibiteurs basés sur la tyrosine des immunorécepteurs (ITIM).
• Elle fonctionne comme un récepteur inhibiteur ; lors de la liaison à des ligands contenant de l'acide sialique ou à C1q, les ITIM sont phosphorylés par des kinases apparentées à Src telles que LCK, ce qui entraîne le recrutement des tyrosine phosphatases PTPN6/SHP-1 et PTPN11/SHP-2, lesquelles réduisent la signalisation immunitaire (PubMed:10887109, 10556798, 10206955). Références associées : PMID:10887109, PMID:10556798, PMID:10206955
• Elle se lie préférentiellement aux acides sialiques liés en alpha-2,3 et alpha-2,6, avec une avidité plus élevée pour les glycannes liés en alpha-2,6 (PubMed:7718872). Référence associée : PMID:7718872
• L'effet répressif de CD33 sur l'activation des monocytes implique la signalisation de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) (PubMed:15597323). Référence associée : PMID:15597323
• Au niveau subcellulaire, CD33 se localise sur la membrane plasmique et dans les peroxysomes.
• Elle est exprimée spécifiquement sur les cellules de la lignée monocytaire/myéloïde, notamment les monocytes, les macrophages et les granulocytes ; dans le système nerveux central, elle se trouve principalement sur les cellules microgliales.
• Les mots-clés mettent en évidence ses rôles dans l'adhésion cellulaire, la régulation immunitaire et l'épissage alternatif, avec des modifications documentées de type glycoprotéine et phosphoprotéine.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 49-259 de CD33 humaine (domaine extracellulaire), ce qui inclut le domaine Ig-like de type V se liant à l'acide sialique. Cette conception cible la conformation native, ce qui la rend adaptée à la détection de CD33 exprimée à la surface dans des applications de type cytométrie en flux (IF/ICC) et en immunohistochimie (IHC-P).
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire attendu de la protéine est d'environ 40 kDa, mais en raison de la glycosylation, la bande observée peut apparaître à un poids moléculaire plus élevé. Il est conseillé d'utiliser un gel réducteur et de valider les résultats avec des témoins positifs appropriés (par exemple, des lignées cellulaires myéloïdes telles que HL-60 ou THP-1).
• Lors de l'utilisation de cet anticorps polyclonal en immunoprécipitation ou en ELISA, il convient de tenir compte du fait que sa nature polyclonale peut accroître la sensibilité, mais aussi augmenter le bruit de fond ; il est recommandé d'optimiser les conditions de blocage et de lavage.
• La réactivité croisée avec la souris et le rat implique la conservation des épitopes ; toutefois, l'alignement des séquences doit être vérifié pour les contextes expérimentaux spécifiques, et une validation dans l'espèce concernée est essentielle.
• Pour l'IHC-P, les méthodes de récupération antigénique (par exemple, tampon citrate, pH 6,0) et les conditions de fixation des tissus doivent être optimisées, car l'accessibilité des épitopes peut varier.
• Cet anticorps convient comme composant de capture ou de détection dans un ELISA sandwich s'il est associé à un anticorps compatible ; les utilisateurs doivent vérifier ses performances dans leurs systèmes tampons spécifiques.

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