Anticorps polyclonal anti-SETD3 pour WB, IP, ELISA - Q86TU7

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de SETD3

• SETD3, également appelée hSETD3 ou C14orf154, est une protéine contenant un domaine SET, codée par le gène SETD3.
• SETD3 est une histidine N-méthyltransférase de l’actine qui méthyle spécifiquement l’actine au niveau de l’histidine-73 (His-73) pour former de la 3-méthylhistidine (téléméthylhistidine). Cette activité est essentielle à une dynamique correcte de l’actine. Références associées : PMID:30526847, PMID:30626964, PMID:30785395
• La méthylation de l’histidine de l’actine par SETD3 est nécessaire à la contraction des muscles lisses, en particulier dans l’utérus pendant le travail et l’accouchement, ce qui souligne son rôle dans les processus physiologiques. Référence associée : PMID:30626964
• L’enzyme présente une stricte spécificité de substrat ; elle ne possède pas d’activité de protéine-lysine N-méthyltransférase et ne méthyle vraisemblablement l’actine qu’au niveau de His-73, ce qui souligne son rôle fonctionnel unique. Références associées : PMID:30626964, PMID:30785395, PMID:31388018
• SETD3 se localise à la fois dans le cytoplasme et dans le noyau, ce qui suggère des fonctions éventuellement spécifiques à chaque compartiment au-delà de la méthylation de l’actine.
• La protéine est soumise à un épissage alternatif, à une phosphorylation et à une conjugaison à l’ubiquitine, et contient un domaine SET qui lie la S-adénosyl-L-méthionine, le donneur de méthyle nécessaire à son activité de transférase.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène utilisé pour cet anticorps est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 72 à 329 de SETD3 humain. Cette région couvre la partie N-terminale et une partie du domaine SET ; l’anticorps devrait donc reconnaître SETD3 pleine longueur (poids moléculaire prédit d’environ 67 kDa).
• Pour le Western blot (WB), il est conseillé d’utiliser des lysats témoins positifs et négatifs appropriés (par exemple, des lignées cellulaires exprimant SETD3 et des lignées avec extinction de SETD3) afin de confirmer la spécificité. La détection d’une bande à ~67 kDa dans les échantillons humains est attendue.
• Dans les essais d’immunoprécipitation (IP), la concentration de l’anticorps et le temps d’incubation peuvent nécessiter une optimisation ; un point de départ standard est de 1 à 2 µg pour 500 µg de lysat.
• Lors de la réalisation d’un ELISA, envisagez d’utiliser la protéine SETD3 recombinante ou des fragments peptidiques comme antigènes de revêtement et effectuez une titration de l’anticorps afin d’optimiser le rapport signal/bruit.
• Étant donné que la réactivité croisée est indiquée pour l’espèce humaine, la validation dans d’autres espèces devra être réalisée indépendamment si nécessaire.

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