Anticorps polyclonal Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 pour WB, IP, ELISA - P0DTC2

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la glycoprotéine Spike (sous-unité S2)

• La glycoprotéine Spike (S) est une protéine de fusion virale de classe I et l'antigène majeur de surface du SARS-CoV-2. Elle médie l'attachement initial aux cellules hôtes via la liaison du domaine de liaison au récepteur (RBD) dans la sous-unité S1 au récepteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2). Références associées : PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Après la liaison au récepteur, la protéine S est clivée de manière protéolytique au site S2′ par des protéases hôtes telles que la sérine protéase transmembranaire 2 (TMPRSS2) ou la cathepsine L, déclenchant des réarrangements conformationnels dans la sous-unité S2 qui entraînent la fusion de l'enveloppe virale avec la membrane de la cellule hôte. Références associées : PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• Le virus peut également employer des récepteurs d'entrée alternatifs, notamment la neuropiline-1 (NRP1) et la neuropiline-2 (NRP2), qui sont fortement exprimées dans les cellules de l'épithélium olfactif et pourraient expliquer les symptômes d'anosmie ; les intégrines ; et le récepteur de l'asialoglycoprotéine 1 (ASGR1) de manière indépendante de l'ACE2. Références associées : PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Localisation subcellulaire : La protéine S est présente sur la membrane du virion et transite par la membrane du compartiment intermédiaire entre le réticulum endoplasmique et l'appareil de Golgi (ERGIC) de l'hôte ; la fusion se produit au niveau de la membrane cellulaire de l'hôte ou à l'intérieur des endosomes.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent une glycosylation N-liquée extensive, des ponts disulfures, une palmitoylation et un clivage en sous-unités S1 et S2. Mots-clés d'UniProt : protéine d'enveloppe virale, transmembranaire, glycoprotéine, interaction hôte-virus, immunoévasion virale, superantigène et inhibition de l'immunité innée de l'hôte.
• Le domaine de tige (stalk) de la protéine S contient trois charnières flexibles qui permettent une liberté d'orientation considérable de la tête de liaison au récepteur, une caractéristique critique pour l'évasion immunitaire et l'engagement du récepteur. Références associées : PMID:32817270

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 1174–1273 de la sous-unité S2 (basé sur la séquence de référence YP_009724390.1). On s'attend à ce que l'anticorps reconnaisse à la fois la protéine Spike de pleine longueur (~141 kDa) et le fragment de clivage S2.
• Pour le Western blot, utilisez des conditions SDS-PAGE réductrices. Une bande correspondant à la protéine Spike de pleine longueur à environ 141 kDa devrait être observée ; des bandes de faible poids moléculaire représentant les produits de clivage S2 peuvent également apparaître. Dans des conditions non réductrices, des oligomères d'ordre supérieur (trimères) peuvent être détectés.
• Incluez des témoins positifs appropriés, tels que des lysats de cellules infectées par le SARS-CoV-2 ou la protéine Spike recombinante. Un témoin de chargement (par exemple, GAPDH, β-actine) est recommandé.
• Pour l'immunoprécipitation, envisagez d'utiliser des billes de protéine A/G pré-couplées à l'anticorps pour minimiser la détection des bandes de chaîne lourde.
• Dans l'ELISA, cet anticorps polyclonal peut servir de réactif de capture ou de détection dans des dosages en sandwich pour la quantification de la protéine Spike. Optimisez les concentrations d'enrobage et les tampons de blocage pour votre format de plaque spécifique.

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